Экспресс тест для диагностики менингита

Менингит представляет собой тяжелое воспалительное заболевание, которое поражает оболочки спинного и головного мозга. Чтобы избежать неприятных последствий, его необходимо уметь во время диагностировать. В статье пойдет речь о том, как провериться на менингит и что для этого нужно сделать.

В большинстве случаев этот недуг диагностируется у детей. По самым разным причинам 85% заболеваемости приходится именно на их долю. При этом в большинстве случаев чаще всего страдают груднички. До начала 20-го века смертность от менингита превышала 90%. Однако после того, как появились антибиотики и другие лекарственные средства, данный показатель существенно уменьшился. В последнее время снова наблюдается рост числа заболеваемости.

1. Описание и симптомы
2. Тест
3. Синдром Кернига
4. Синдром Брундзинского
5. Как определить
6. Какой анализ имеет решающее значение
7. Выводы

Описание и симптомы

То, как проявляет себя заболевание, зависит от патогенетического типа протекания инфекции.

Обычно длительность инкубационного периода менингита составляет 5-6 дней.

Основными симптомами недуга являются:

1. высокая температура;
2. головная боль;
3. нетерпимость света и звука;
4. онемение в области шеи;
5. нарушение сознания;
6. судороги;
7. рвота;
8. лихорадка;
9. высыпания на коже.

Причинами развития заболевания называют грибки, бактерии и вирусы. Нередко менингит появляется в результате осложнение ряда инфекционных заболеваний. Менингит может закончиться и летальным исходом. Лечение недуга должно осуществляться исключительно в условиях стационара под строгим наблюдением врача.

Пик заболеваемости менингитом растет осенью, зимой и весной. Ему способствуют следующие факторы:

1. авитаминоз;
2. переохлаждение организма;
3. резкое колебание температур;
4. ненормальная вентиляция в помещениях, где присутствует огромное количество людей.

Справка! Ученые заметили, что существует 10-15-летняя цикличность заболевания, когда в особенности растет число пациентов. В основном недуг развивается в странах с плохими санитарными условиями.

В первую очередь наличие менингита можно установить предварительно с помощью специальных тестов, которые можете провести даже в домашних условиях.

Из-за специфических симптомов они сразу могут показать, болен ли человек.

Человек не способен разогнуть согнутые в коленях ноги. Пациента кладут на спину и сгибают ему ногу в коленном и тазобедренном суставе под углом 90 градусов. Если человек болен менингитом, он не сможет после этого разогнуть ноги.

У этого синдрома есть четыре симптома. Первый – если голову наклонить вперед, то ноги непроизвольно сгибаются и подтягиваются к животу. Второй симптом – если надавить на лобок, то ноги сгибаются в коленных и тазобедренных суставах. Третий симптом – при сгибании одной ноги, другая сама подтягивается к животу. Четвертый – если надавить на щеку, то поднимутся плечи и согнутся руки в локтях.

Эти синдромы наблюдаются как у взрослых, так и у детей, больных менингитом.

Как определить

Дифференциальная диагностика менингита проводится разными способами.

Мы приведем самые эффектные из них:

1. общий анализ крови. Он осуществляется путем забора на посев. Если человек страдает от менингита, то анализ всегда положительный, нередко выявляются менингококки и пневмококки. Также растет уровень лейкоцитов в крови. Именно это является главным показателем развития инфекции у человека. Посредством такой проверки появляется возможность понять, каковы показатели мочевины, креатины и электролитов в сыворотке биоматериала.
2. исследование ликвора и люмбальная пункция. Врачи вводят иглы в подпаутинное пространство. С помощью лабораторной диагностики они не только узнают о наличии недуга, но и выясняют, каков тип возбудителя. Для применения данного метода должны существовать определенные показания. В качестве них может служить подозрение на рак в мозговой структуре, нейроинфекции, кровоизлияния.

Важно! Люмбальная пункция дополняется обязательным введением особого вещества рентгеноконтрастного типа. Стоит не забывать, что соответствующий метод является эффективным, но опасным.

Нередко способ приводит к увеличению внутричерепного давления, что нередко служит причиной смерти. Как проверить наличие заболевания с помощью этой процедуры:

1. пациент должен лечь на бок и подтянуть к груди колени, голова наклоняется вперед;
2. далее расширяются межпозвоночные промежутки, чтобы доктору было удобно работать;
3. сам кожный покров предварительно обрабатывается анестетиком;
4. пациент получает местный наркоз;
5. вещество вводится поэтапно тремя путями;
6. игла с прикрепленным мандреном вводится аккуратно и постепенно продвигается вперед, пока не начинает ощущаться провал. Это значит, что прибор
7. миновал связки и твердую оболочку;
8. чистая пробирка наполняется ликворной жидкостью, оценивается ее вид и цвет.

Популярным является бактериологический анализ.

Чтобы подтвердить диагноз, медики берут мазок спинномозговой жидкости.

Так, выявляется основной возбудитель недуга.

Преимуществами способа являются:

1. возможность анализа биоматериала у детей;
2. высокая специфичность;
3. определяется чувствительность микробов к лекарственным средствам.

В то же время существуют и недостатки. В частности, к забору материала выдвигаются серьезные требования, он может проводиться исключительно в оборудованных помещениях специалистами. Также необходимо будет длительное время ждать результатов

Важно! Используется только стерильная посуда для забора материала. Анализ делается до начала приема антибиотиков.

Еще одной разновидностью является серологическое исследование. Чтобы определить присутствие патологических микроорганизмов, берется сыворотка крови из вены. Метод применяется не только при менингите, но и при других недугах.

КТ рентген или рентгенография является обязательным методом диагностики, когда у человека подозревается менингит. Противопоказания здесь отсутствуют. На данное обследование пациент отправляется, когда наблюдается следующая симптоматика:

1. кашель с мокротой;
2. озноб;
3. лихорадка;
4. изменения в анализах крови.

Справка! Рентген можно делать не более трех раз в год, однако в случае пневмонии он назначается чаще.

Видно ли заболевание на МРТ? Именно этот метод считается самым точным для постановки диагноза на сегодняшний день. В этом случае облучение является минимальным.

Как диагностировать разные виды менингита:

1. Туберкулезный. Дифференциальная диагностика этого подвида заболевания должна проводиться фтизиатром вместе с неврологами. Здесь проводится анализ цереброспиральной жидкости. Она берется путем любмальной пункции. Признаком наличия недуга считается выпадение фибринозной пленки. Она образуется в течение суток в пробирке.
2. Бактериальный. Диагностику этого подвида менингита стоит проводить в оперативном порядке, когда фиксируется характерная симптоматика. В частности, берется спинальная пункция и посев ликвора на бактерии. При необходимости врач может выпустить направление на МРТ головы.
3. Серозный. Исключить или подтвердить соответствующий диагноз поможет анализ спинномозговой жидкости. Здесь ликвор берется посредством люмбальной пункции. Однако существуют противопоказания в виде, инфекционно-токсического шока, судорог и поражения кожи в области проведения забора. Когда врач предполагает вторичный характер гнойного менингита, назначается рентген легких, обследование у терапевта и пульмонолога.

Как видим, при туберкулезном, бактериальном или же серозном менингите всегда берутся одни и те же анализы.

Какой анализ имеет решающее значение

Главным методом диагностики менингита является анализ ликвора.

Последний представляет собой жидкость, которая циркулирует в спинном и головном мозге.

При нормальном ее состоянии она должна выглядеть как прозрачная субстанция.

В ликворе содержатся различные химические элементы:

1. гормоны;
2. органические и неорганические соединения;
3. витамины;
4. вещества, отвечающие за переработку крови.

Важно! Основной функцией ликвора считается защита мозга от критических повреждений.

Если говорить о главном признаке менингита, то им является головная боль. Нередко предвестник заболевания — ОРВИ. Кроме этого, фиксируются пятна в форме звездочек, повышенная сонливость, общая слабость и судороги.

Полезное видео по теме:

Выводы

Существует множество методов диагностики менингита, но главным из них является анализ спинномозговой жидкости. Выявить заболевание в домашних условиях довольно трудно, поскольку его легко спутать с обычными простудными недугами. При малейшем подозрении необходимо срочно обратиться в медучреждение. Чем быстрее будет выполнена диагностика, тем легче пациент перенесет болезнь без серьезных последствий.

Латексная агглютинация

Наборы для идентификации и дифференциации микроорганизмов из клинического материала или из чистой культуры методом латексной агглютинации.

Выпускаются в двух форматах:

1) Жидкие

Латексный реагент представлен в жидкой форме, хранение при + 2-8° С 1 год

Латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован, хранение при + 2-25° С до 2 лет

Артикул

Название (русское/английское)

Фасовка

Описание

Бактериальный менингит

Набор Wellcogen на менингококковые инфекции/Wellcogen Bacterial Antigen Kit

Быстрый тест для прямого определения антигенов в жидкостях тела методом латексной агглютинации (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды):

- Streptococcus гр. B

- H. influenzae тип b

- N. meningitidis групп A, C, Y, W135

- N. meningitides гр. B/E.coli K1.

• Время реакции – 3 минуты
• Чувствительность – 97% *
• Специфичность – более 98%
• В состав набора входят все необходимые компоненты

*для Н. influenzae тип b

Набор Wellcogen для определения H. influenzae b/Wellcogen Haemophilus influenzae b Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis A, C, Y, W 135/Wellcogen Neisseria meningitidis A, C, Y, W135 Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения N. meningitidis B/E. coli K1/Wellcogen Neisseria meningitidis B/E. coli K1

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения стрептококков группы B/Wellcogen Strep B Rapid Latex Agglutination Test

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Набор Wellcogen для определения Streptococcus pneumoniaе/Wellcogen Streptococcus pneumoniae Test Kit

Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)

Streptococcus

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, D, F и G /PathoDxtra Strep Grouping Kit

Быстрый тест для дифференциации групп стрептококков A, B, C, D, F и G по Лансфильду с первичных чашек с культурой.

Набор для диагностики стрептококков групп A/PathoDxtra Strep Group A Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп B/PathoDxtra Strep Group B Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп C/PathoDxtra Strep Group C Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп D/PathoDxtra Strep Group D Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп F/PathoDxtra Strep Group F Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор для диагностики стрептококков групп G/PathoDxtra Strep Group G Latex

Предназначен только для использования с набором DR0700M

Набор Streptex для диагностики групп стрептококков A, B, C, D, F и G (ферментная экстракция)/Streptex

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, D, F, G по Лансфильду с использованием ферментной экстракции

Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Rapid

Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду с использованием кислотной экстракции

Набор для быстрой диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Acid Extraction Kit

Набор для быстрой кислотной экстракции для использования с Streptex Rapid Latex Agglutination Test для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду

Набор DrySpot для диагностики Streptococcus pneumonia/Pneumo

Сухой латексный тест для подтверждения Streptococcus pneumoniae в культурах на чашках или положительных культурах крови.

Staphylococcus и MRSA (метициллин-резистентный стафилококк)

Набор DrySpot для идентификации Staphylococcus aureus (MRSA)/Dryspot Staphytect Plus

Сухой латексный тест для идентификации S. aureus после первичного посева

Плазма кроличья для выявления коагулазы (лиофилизированная)/Coagulase Plasma (lyphohilized)

Реагент для выявления фермента коагулазы у стафилококков

Менингококковая инфекция носит спорадический характер, однако, несмотря на это, она является одной из самых опасных и непредсказуемых по молниеносности течения. 1/3 всех случаев составляют гипертоксические, молниеносные формы, которые часто заканчиваются смертью больного. Течение менингококковой инфекции зависит от ранней диагностики и адекватной стартовой терапии на всех этапах лечения. Диагностика менингококковой инфекции основана на эпидемиологических данных, данных, полученных в результате опроса больного, общеклинических и лабораторных методах исследования.

При помощи бактериоскопии можно обнаружить возбудитель и провести анализ клеточного состава ликвора. Бактериологическое исследование проводится для получения чистой культуры менингококков (Neisseria meningitidis). Серологический метод позволяет выявить бактериальные антигены и антитела в сыворотке крови.

Материалом для исследования являются слизь из носоглотки, спиномозговая жидкость (ликвор), кровь и гной, соскоб кожи из области геморрагических высыпаний.

Рис. 1. На фото тяжелая форма менингококкового сепсиса у детей.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием общеклинических методов исследования

• Менингококковый назофарингит протекает с небольшим лейкоцитозом и нормальной или слегка увеличенной СОЭ. При диагностике менингококкового назофарингита используются эпидемиологические и данные бактериологического обследования. На основании только клинических данных данное заболевание диагностировать чрезвычайно трудно.
• Генерализованные формы заболевания протекают с выраженным нейтрофильным лейкоцитозом и значительным сдвигом в формуле, из периферической крови исчезают эозинофилы, увеличивается СОЭ.
• Токсическая форма менингококцемии протекает с тромбоцитопенией и небольшой анемией. О сгущении крови в сосудистом русле говорит повышенный уровень гематокрита. Развившаяся лейкопения говорит о нарастании тяжелой интоксикации и является плохим прогностическим признаком. В крови падает уровень тромбоцитов, изменяется коагулограмма. Появляются признаки метаболического ацидоза и нарушения электролитного состава крови.
• Появление в моче следов белка, цилиндров и единичных эритроцитов говорит о токсическом поражении почек. Значительное увеличение белка, зернистых цилиндров и эритроцитов говорит о развитии острой почечной недостаточности.

При массовой гибели менингококков выделяются эндотоксины, воздействие которых на внутренние органы и системы организма определяют клиническую картину заболевания, тяжесть которого диктует применение определенного объема исследований.

Рис. 2. На фото менингококцемия у детей.

Исследование спинномозговой жидкости с целью диагностики менингококкового менингита

Исследование спинномозговой жидкости при диагностике менингита имеет решающее значение. Забор спинномозговой жидкости осуществляется при люмбальной пункции.

• При явлениях менингизма клеточный состав спинномозговой жидкости остается нормальным, отмечается ее незначительное повышенное давление.
• В первые часы заболевания (фаза серозного воспаления) ликвор остается прозрачным, отмечается небольшое повышение клеточных элементов (до 50 — 200 клеток) с преобладанием лимфоцитов. Антибиотикотерапия в этот период всегда дает положительный эффект.
• К концу первых суток серозное воспаление переходит в гнойное. Спиномозговая жидкость становится мутной. Цитоз достигает высоких цифр (несколько тысяч в 1 мм 3) . До 90% его клеточного состава составляют нейтрофиллы. Содержание белка невысокое. Показатель уровня сахара умеренно снижен. Уровень глобулинов в ликворе значительно повышен (реакция Нонне-Апельта резко положительная).

Спиномозговая жидкость подлежит общеклиническому, бактериологическому и биохимическому исследованию, для чего готовится 3 пробирки. Ликвор в 4-й пробирке остается в отделении. За ним устанавливается наблюдение на предмет образования пленки, характерной для туберкулезного менингита.

Рис. 3. На фото слева вид ликвора при гнойном менингите. На фото справа менингококки из спинномозговой жидкости (бактериоскопия) больного менингитом.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием биохимических методов исследований

При генерализованных формах менингококковой инфекции исследуется кислотно-основное состояние и электролиты плазмы крови. При менингококковом сепсисе контролируются показатели свертывающей системы крови и проводятся почечные тесты.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием бактериоскопического метода исследования

Анализ на туберкулез методом прямой бактериоскопии является наиболее простым и быстрым способом обнаружения микобактерий в исследуемом материале. Выявить наличие возбудителя можно в течение одного часа. Данная методика используется для экспресс диагностики.

Для бактериоскопического исследования применяется мазок, взятый из носоглотки, толстая капля крови и ликвор. Мазки окрашиваются по Граму или обрабатываются метиленовым синим.

Менингококки представляют собой диплококки (сдвоенные кокки бобовидной формы) размером от 0,6 до 0,8 мкм. При окрашивании по Граму приобретают розовую окраску (грамотрицательные). Располагаются внутри и внеклеточно.

• Мазок из носоглотки берется натощак специальным стерильным тампоном, укрепленным на алюминиевой проволоке.
• При приготовлении мазков из спинномозговой жидкости обращают внимание на внешний вид биологического материала. При гнойном характере ликвора мазки готовятся из осадка, который получают при центрифугировании материала.
• Кровь для бактериоскопического исследования берется при ее заборе из вены. Далее готовится препарат толстой капли, который окрашивается метиленовым синим.

Рис. 4. На фото Neisseria meningitidis (вид под микроскопом). Окраска по Граму.

Рис. 5. Приготовление мазков толстой капли. В препарате (фото справа) видны менингококки, окрашенные в темно-синий цвет (окраска метиленовым синим).

Рис. 6. Менингококки в цитоплазме нейтрофильного лейкоцита у больного тяжелой генерализованной формой менингококковой инфекции.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием бактериологического метода исследования

Анализ на менингококк методом посева биологического материала (культуральный метод) более чувствителен, чем бактериоскопия. Для исследования используются мазки носоглоточной слизи, кровь, плевральная жидкость и ликвор. Ответ врач получает через 4 суток.

Менингококки хорошо растут на средах, которые содержат нативный белок (сыворотка и кровь, асцитическая жидкость, яичный белок). Оптимальная температура роста 38-36 ° С. На простых средах микробы не растут. Neisseria meningitidis являются аэробами (живут и развиваются только в присутствии кислорода). Для получения чистой культуры в питательные среды добавляют антибиотики, которые подавляют рост сопутствующей микрофлоры. После получения роста колоний менингококков проводится тест на чувствительность к антибиотикам.

Рис. 7. Neisseria meningitidis при росте на сывороточном агаре. Колонии менингококков слегка выпуклые, полупрозрачные, с гладкой поверхностью и ровными краями, в проходящем свете имеют голубоватый оттенок.

Диагностика менингококковой инфекции с использованием серологических методов исследования

Серологические исследования используются для выявления антител в организме человека, вырабатываемых против антигенов менингококков. Данная методика используется для ретроспективной диагностики и применяется с интервалом от 7 до 12 дней. С целью обнаружения антигенов возбудителя используются реакции агглютинации.

В последнее время для выявления специфических антител в крови больного или спинномозговой жидкости стали применяться экспресс-методики:

• методика иммунофлюоресценции,
• реакция энзиммеченых антител,
• реакция преципитации в геле,
• иммуноэлектрофорез с групповыми преципитирующими антисыво­ротками,
• методика встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ),
• иммуноферментный анализ (ИФА),
• радиоиммунологические методы.

к содержанию ↑

Применение ПЦР для диагностики менингококковой инфекции

Диагностика коклюша с применением ПЦР (полимеразной цепной реакции) является самой перспективной методикой в современных условиях. Высокая чувствительность теста позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если в исследуемом материале их несколько десятков и даже единиц. Данный метод является высокоспецифичным. Его особая ценность заключается в том, что выявление менингококков в биологическом материале становится возможным, когда другие методы исследования дают отрицательный результат.

Рис. 8. Методика ПЦР является высокоспецифичной и позволяет выявлять ДНК бактерий, даже если их в исследуемом материале несколько десятков и даже единиц.

Использование дополнительных методов исследования

Из дополнительных методов исследования применяются электрокардиограмма (ЭКГ), фонокардиография (ФКГ), электроэнцефалограмма (ЭЭГ), компьютерная томография головного мозга (КТ), нейросонография (НСГ), цветовое доплеровское картирование и др.

При необходимости к обследованию больных привлекаются врачи разных специальностей — окулисты, отоларингологи, невропатологи.

Рис. 9. Электроэнцефалограмма позволяет выявлять структурные изменения в головном мозге.

Рис. 10. Компьютерная томография головного мозга позволяет выявлять наличие гематом, гидроцефалию и другие объемные поражения, локализующихся в головном мозге.

Рис. 11. Электрокардиограмма позволяет исследовать и регистрировать электрические поля, образующиеся при работе сердца.

Рис. 12. Нейросонография (ультразвуковое исследование) используется для исследования у детей в возрасте до 1-го года структур полости черепа.

Дифференциальная диагностика менингококковой инфекции

• Менингококковый менингит следует дифференцировать с менингитами, вызванными стафилококками, стрептококками, клебсиеллами, синегнойной и гемофильной палочками, грибами, тяжелой формой дизентерии, сальменеллеза и брюшного тифа.
• Менингококцемию, протекающую с сыпью, следует отличать от краснухи, кори, скарлатины, иерсиниоза, геморрагических васкулитов, тромбопенических состояний и сепсиса.
• Менингококковую инфекцию, протекающую с поражением центральной нервной системы, следует дифференцировать от острых респираторных вирусных инфекций, в том числе гриппа, протекающих с явлениями поражения головного мозга и его оболочек.

Рис. 13. На фото менингококцемия у взрослого.

Ранняя диагностика менингококковой инфекции и своевременно начатое лечение обеспечивает благоприятный исход заболевания.

При проведении бактериологических исследований на менингококк следует помнить о его нестойкости, чувствительности к малейшим отклонениям от температуры 36-37°С. Термостат должен быть хорошо отрегулирован, питательные среды перед посевом — прогреты в термостате в течение 30-40 мин, агаровые среды — свежими (приготовленными не ранее, чем за одни сутки до использования). Среды с посевами могут находиться вне термостата не более 30 мин.

Материалом для исследования на менингококковую инфекцию служит спинномозговая жидкость, кровь, носоглоточная слизь, иногда серозные выпоты, отделяемое петехий, а также образцы трупного материала.

Наиболее ответственными являются исследования при подозрении на генерализованные формы — менингококцемию и менингит.

а) Исследование СМЖ при подозрении на менингит:

Первый день. При подозрении на менингит основным материалом для исследования является СМЖ. Ее берут (желательно, до применения антибиотиков) с соблюдением всех правил асептики стерильной иглой, соединенной со шприцем, и немедленно засевают в питательные среды, а также делают мазок на стекле.

Одновременный посев СМЖ на сывороточный агар и обычный мясопептонный агар значительно облегчают дифференциацию выросших микроорганизмов и ускоряют их идентификацию.

Посевы помещают в сосуд (желательно, чтобы в нем содержалось 5-7% CO₂) и инкубируют в термостате при 36-37°С 20-22 ч.

Мазок СМЖ фиксируют спиртом, окрашивают 1%-ным раствором метиленового синего и микроскопируют. В препарате бывают видны диплококки и единичные кокки, расположенные вне и внутри полинуклеаров. У фагоцитированных кокков заметна капсула в виде бесцветного ободка на фоне окрашенной протоплазмы фагоцита.

На этом этапе окраска по Граму не рекомендуется, так как применяющиеся реактивы сильно деформируют фагоциты, находящиеся в СМЖ. На основании микроскопии мазка в случае обнаружения каких-либо микроорганизмов возможна выдача предварительного ответа.

Второй день. Через 20-22 ч просматривают чашки с выросшими колониями. Из СМЖ возбудитель вырастает в чистой культуре, так как в норме в ликворе нет никакой микрофлоры. Из выросших колоний делают препараты-мазки, окрашенные но Граму в модификации Г.П. Калины. В препаратах-мазках культур у менингококков меньше выражена тенденция к образованию пар, они могут быть расположены беспорядочно и поодиночке (см.рис.13.2.2, цв. вкл.). Отмечается неравномерность окрашивания клеток — от бледно-розовых до ярко-малиновых.

С учетом сказанного дальнейшее исследование выросшей культуры производят в соответствии с ее морфологическими, тинкториальными и культуральными свойствами. Если в мазках из колоний выявлены грамотрицательные кокки, то проводят их идентификацию как возможных представителей рода нейссерий, прежде всего менингококка. Ставят пробы на оксидазу и каталазу, делают отсев в пробирку с сывороточным агаром для получения чистой культуры. Если число выросших колоний позволяет, возможен отсев с чашки прямо на среду для определения чувствительности к антибиотикам.

В тот же день производят высев из среды обогащения в чашки со средами того же состава, что и при посеве нативной СМЖ.

Третий день. Изучают выросшую чистую культуру. Убеждаются в отсутствии у нее пигмента; если надо, повторяют реакции на оксидазу и каталазу. Для окончательной дифференциации менингококка и непигментных нейссерий и моракселлы (в редчайших случаях способных вызвать менингит) производят отсев на питательный агар без сыворотки и для контроля — на сывороточный агар. Осуществляют посев для определения чувствительности к антибиотикам (если это не было сделано накануне). Учитывая быструю утрату капсул менингококками, определяют серологическую группу, не дожидаясь окончательных результатов идентификации; для определения серогруппы ставят реакцию агглютинации (РА) на стекле и, если возникает необходимость, — развернутую РА.

Посевы на среды для определения сахаролитических свойств у культур, выделенных из СМЖ, необязательны. При отсутствии в ликворе сопутствующей микрофлоры и ничтожной вероятности выделения прочих нейссерий данным тестом можно пренебречь.

Просматривают посевы в чашках, сделанные накануне из среды обогащения, и исследуют их по схеме 2-го дня. Если роста на чашках не выявлено, то пробирку со средой обогащения выдерживают в термостате 7 дней, делая контрольные высевы через день по указанной схеме.

Четвертый день. Окончательно изучают посевы, сделанные накануне. Убеждаются в отсутствии пигментообразования у изучаемой культуры и в ее неспособности расти на агаре без сыворотки, учитывают антибиотикограмму, выдают ответ о результатах бактериологического исследования. В случае отсутствия роста при посеве нативной СМЖ и высеве из среды обогащения выдачу окончательного ответа задерживают до получения результата (положительного или отрицательного) при высеве из среды обогащения после 7 дней инкубации.

б) Исследование крови при генерализованных формах. Независимо от того, имеются или не имеются признаки бактериемии при менингите, а также при подозрении на менингококкемию необходимо сделать посев крови.

Кровь (не менее 5,0 мл) берут из вены и засевают во флакон с 50 мл полужидкого питательного агара. Посев инкубируют в термостате в течение 7 дней, произведя высев через 24 ч и в случае отсутствия роста повторяя высевы через день на те же среды, что и при посевах СМЖ. Выросшую культуру (гемокультуру) изучают так же, как и культуру из СМЖ.

в) Исследование носоглоточной слизи. При генерализованной форме, у реконваллесцентов, назофарингите и подозрении на бактерионосительство у здоровых лиц (в окружении заболевших) исследуют слизь, взятую с задней стенки глотки.

Первый день. Материал берут натощак ватным тампоном, укрепленным на мягком проволочном стержне, изогнутом под углом 120°. Левой рукой берущий материал надавливает шпателем на корень языка, а правой — осторожно, не касаясь зубов и слизистой рта, заводит тампон за небную занавеску, прикладывает его к задней стенке глотки и выводит из ротовой полости, после чего удаляет шпатель. Материал немедленно засевают на питательную среду — 20%-ный сывороточный агар — в чашке Петри. Для подавления посторонней флоры (грамположительной) в среду рекомендуется вводить линкомицин. Наилучшие результаты можно получить при одновременном использовании двух сред — сывороточного агара с линко-мицином (его засевают первым) и сывороточного агара без антибиотика.

При невозможности немедленно посеять материал в связи с необходимостью транспортировки (более 3 ч) тампон с разогнутым стержнем погружают в транспортную среду — питательный бульон с линкомицином, из которой после доставки в лабораторию производят высев на сывороточный агар в чашку Петри. При транспортировке засеянных (агаровых или транспортных) сред не допускают их охлаждения.

Второй день. Через 22-24 ч инкубации посевов в термостате на поверхности среды вырастает большое количество разнообразных колоний — представителей нормальной микрофлоры. Колонии с признаками желтоватого пигмента, а также сухие и слизистые не исследуют. Для выделения чистой культуры отбирают колонии, подозрительные на менинго-кокковые. Их отсевают в пробирки или на сектора чашек с 20%-ным сывороточным агаром для менингококка.

Третий день. Выделенные культуры дифференцируют с видами нейссерий — постоянными обитателями слизистых оболочек верхних дыхательных путей, но сходными по ряду признаков с менингококком. Они также обладают оксидазой и каталазой, но, кроме глюкозы и мальтозы, могут разлагать другие углеводы и восстанавливать нитраты. Многие нейссерии — комменсалы носоглотки способны расти на средах без добавления сыворотки, чем они отличаются от менингококка. Их рост не подавляется линкомицином.

Помимо этого менингококк необходимо дифференцировать со сходной морфологически и культурально моракселлой (бранхамеллой) — комменсалом ротоглотки Moraxella (Branchamella) catarrhalis, отличающейся положительной реакцией на восстановление нитратов.

Выделенные культуры снова просматривают на предмет пигментообразования. Наличие пигмента лучше выявлять при дневном свете. Для дальнейшего изучения оставляют лишь культуры, дающие нежный сливной рост непигментированных колоний. Из отобранных культур готовят препараты-мазки, окрашенные по Граму в модификации Калины. Культуры, содержащие грамотрицательные парные и беспорядочно расположенные неравномерно окрашенные кокки оставляют для дальнейшего изучения при помощи следующих тестов: на оксидазу, на каталазу, на ферментацию глюкозы, мальтозы, лактозы, фруктозы, сахарозы, способность расти на бессывороточном агаре (того же состава, что и сывороточный) при 37°С и на сывороточном агаре при 22°С, возможен посев на сывороточный агар с желчью. Последние два теста имеют значение только при положительном результате: рост при 22°С и на среде с желчью не позволяет отнести выделенную культуру к виду N.meningitidis. При необходимости ставят тест на восстановление нитратов для дифференциации с бранхамеллой.

Каждая изучаемая культура отсевается в пробирку с сывороточным агаром, чтобы на следующий день иметь суточную культуру.

Четвертый день. Изучают посевы, сделанные накануне. Суточные культуры, идентифицированные как менингококк, подлежат серологическому группированию в РА в этот же день.

По результатам исследований выдается окончательный ответ о выделении или отсутствии менингококка в носоглоточной слизи обследуемого лица.

д) Исследование материала из петехий. При наличии кожных высыпаний — петехий можно сделать попытку обнаружения в них менингококка. Кожу вокруг петехий осторожно обтирают тампоном, смоченным в 70%-ном спирте. При наличии некроза материал можно взять прокаленной и остуженной бактериологической петлей непосредственно из некротизированных участков. Если кожа не повреждена, то из петехий берут смыв. Для этого тонкой стерильной иглой, соединенной со шприцем, в котором содержится 0,1-0,2 мл изотонического раствора натрия хлорида, прокалывают кожу, вводят в толщу петехии жидкость и отсасывают ее обратно.

Взятый из петехии материал немедленно засевают в чашку Петри на сывороточный агар с линкомицином для подавления кожной микрофлоры и, распределив его петлей по среде, делают посев этой же петлей на сывороточный агар в чашке.

Из оставшегося в игле экссудата можно приготовить препарат-мазок, который подсушивают, фиксируют и окрашивают но Граму в модификации Калины.

Мазок из экссудата петехии можно сделать путем отпечатка. Для этого поверхность петехии слегка скарифицируют прокаленной и остуженной петлей, после чего к петехии прикладывают плашмя стерильное предметное стекло. Мазок-отпечаток обрабатывают так же, как и обычный бактериологический мазок.

При микроскопии иногда удается увидеть парные и единичные грамотрицательные кокки, на основании чего возможна выдача предварительного ответа.

Засеянные среды инкубируют при 37°С 24 ч в атмосфере CO₂ (при отсутствии роста — 48 ч). Выросшие колонии, подозрительные на менингококковые, отсевают и изучают по схеме, описанной для культур, выделенных из носоглоточной слизи.

д) Исследование трупного материала. Трупный материал для бактериологического исследования желательно брать в наикратчайший срок после гибели больного.

Для исследования берется кровь из сердца, СМЖ, гной с поверхности головного мозга или кусочки головного мозга при менингите, в случаях менингококкемии — кусочки паренхиматозных органов.

Кровь в количестве 5-10 мл берут стерильной пипеткой, соединенной с грушей, из правого сердца после его вскрытия скальпелем. 3-7 мл крови засевают во флакон с 50 мл полужидкого агара. Оставшуюся кровь используют для серологического исследования.

Гной с мозговых оболочек берут стерильным ватным тампоном и засевают на те же среды, что и СМЖ. Из гноя готовят мазки. Возможно приготовление отпечатков с поверхности мозговых оболочек.

Перед взятием материала из органов место разреза прижигают прокаленным шпателем. По участку прижигания делают разрез прокаленным и остуженным скальпелем, после чего из глубины разреза стерильным тампоном берут тканевую жидкость. Ее засевают на применяемые для выделения менингококка питательные среды. Отдельными тампонами берут материал для приготовления препаратов-мазков.

Культуру идентифицируют по той же схеме, что и при выделении менингококка из носоглоточной слизи.

Иногда культура дает реакцию агглютинации одновременно с двумя и более иммунными сыворотками (за счет общих антигенов бактериальной клетки). В таких случаях для точного выявления серогруппы ставят развернутую реакцию агглютинации в лунках полистироловых пластин, смешивая густые взвеси культуры с различными разведениями сыворотки (1:2; 1:4; 1:8 и т.д.). В каждую лунку вносят по капле одного из разведений сыворотки и по капле густой взвеси культуры; в контрольную лунку вместо сыворотки вносят каплю физиологического раствора. Пластины встряхивают в течение 1-2 мин, после чего в каждую лунку добавляют по 1 мл изотонического раствора натрия хлорида и учитывают результаты, начиная с контрольной лунки. Если в ней не отмечается спонтанной агглютинации, то серогруппу определяют в соответствии с той сывороткой, которая дала положительную реакцию при наивысшем разведении. Например, культура агглютинировалась сывороткой группы А при разведении 1:8, сыворотками групп В — 1:2 и С — 1:2. Следовательно, данная культура относится к серогруппе А.

При наличии типовых и субтиповых сывороток определяют антигены наружной мембраны путем ИФА.

ж) Сохранение и пересылка выделенных культур менингококка. Лучшим способом сохранения менингококковой культуры является лиофильное высушивание под вакуумом из замороженного состояния. При отсутствии такой возможности суточную культуру менингококка засевают в столбик полужидкого агара с добавлением 20% сыворотки и помещают в термостат. Через 22-24 ч инкубации появляется рост преимущественно в верхней части среды. На среду наслаивают 1,5-2 мл стерильного вазелинового масла и хранят культуру при комнатной температуре (не в холодильнике!). Из культуры можно производить неоднократные высевы. Ежемесячно ее обновляют.

Культуру в столбике можно транспортировать при условии предохранения от холода и от смачивания пробки. Сохраняющаяся на средах культура менингококка быстро утрачивает капсульный (группоспецифический) антиген, а также приобретает способность к росту на бессывороточных средах.

з) Определение чувствительности выделенных культур менингококка к антибиотикам. Для определения чувствительности менингококка к антибиотикам используют сухие стандартные агаровые основы — среду АГВ или агар Мюллера-Хинтона с добавлением 20% нормальной лошадиной сыворотки. Применяют метод серийных разведений или дискодиффузионный с использованием стандартных дисков. Определяют чувствительность менингококка к пенициллинам (начиная с оксациллинового диска, содержащего 1 мкг), левомицетину, цефалоспоринам 3-го поколения, фторхинолонам.

и) Экспресс-методы микробиологической диагностики менингококкового менингита. В СМЖ больного содержатся не только микроорганизмы, но их антигены и прочие компоненты клеток, особенно при массовой гибели менингококков под действием антибиотиков. В ликворе больного удается быстро обнаружить группоспецифический капсульный полисахарид при помощи гомологичных иммунных сывороток в реакциях преципитации, встречного иммуноэлектрофореза, а также с использованием коммерческих реагентов в реакциях коагглютинации (КоАг) и латекс-агглютинации (ДА) на стекле. Наиболее широкое применение получила реакция ЛА с набором фиксированных на частицах латекса антител к основным возбудителям гнойного менингита — менингококкам серогрупп А и С, H.influenzae, пневмококку, стрептококку группы В.

Реакция латекс-агглютинации, как и близкая к ней реакция КоАг, ставится на стекле в капле прогретой при 100°С СМЖ. Образование хлопьев на фоне просветления в капле ликвора с реагентом указывает на положительный результат. Время проведения реакции — 2-3 мин.

В соответствии с рекомендациями ВОЗ, выявление специфического антигена в СМЖ является таким же бесспорным подтверждением этиологии менингита, как и выделение из СМЖ бактериальной культуры.

Перспективным методом, не нашедшим пока еще применения в широкой практике, является обнаружение в жидкостях организма специфического генного материала при помощи ПЦР.

к) Серологическая диагностика менингококковой инфекции. Одним из методов подтверждения менингококковой природы генерализованной инфекции является обнаружение группоспецифических антител к капсульному полисахариду. Антитела появляются в конце первой недели болезни и сохраняются в течение всего заболевания. Образование антител к полисахаридам наблюдается при менингококовом назофарингите и бактерионосительстве, но их уровень ниже, чем при генерализованных формах. Для выявления антител к капсульным полисахаридам используют реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА) или иммуноферментный анализ.

При менингококковой этиологии заболевания (менингит, септицемия) в парных сыворотках, из которых одна взята в первые дни болезни, а вторая — на 10-15-й день, отмечается нарастание в 4 раза и более титров антител к полисахариду менингококка той серогруппы, которая вызвала данное заболевание.

Массовые постановки РНГА на наличие антител к группоспецифическим полисахаридам используются эпидемиологами для выявления распространенности той или иной серогруппы среди населения (или в коллективе) в форме бактерионосительства.

РНГА ставят с коммерческими эритроцитарными диагностикумами, содержащими в качестве антигенов капсульные полисахариды менингококков серогрупп А, В и С. Для иммуноферментного анализа используют коммерческую тест-систему.

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 27.12.2019