Сенсибилизированный латекс для менингита
Диагностический набор реагентов для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов Haemphilus influenza тип b,Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitides типа А, Neisseria meningitides типа В, Neisseria meningitides тип С и Neisseria meningitides тип W 135 в рекции латекс-агглютинации, жидкий
- Описание
Описание
Латексная тест-система ГБМ Оболенск
Латексная тест-система ГБМ Оболенск предназначена для быстрой идентификации возбудителей гнойных бактериальных менингитов —Haemophilus influenzae тип b, Streptococcus pneumoniae, Neisseria meningitidis тип A, Neisseria meningitidis тип B, Neisseria meningitidis тип С и Neisseria meningitidis тип W 135 методом латекс-агглютинации при проведении клинических лабораторных исследований.
Латексная тест-система ГБМ обеспечивает типоспецифическое выявление и идентификацию микробных клеток ГБМ непосредственно в образцах спинномозговой жидкости или крови, полученных от больных людей с клиническими симптомами менингита, а также в суспензиях, полученных из колоний микроорганизмов, выращенных на плотных питательных средах.
Диагностическая чувствительность Латексной тест-системы ГБМ – не менее 80%, диагностическая специфичность – не менее 90%
Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) должен давать реакцию агглютинации латекса (РАЛ) с микробной взвесью H. influenzae тип b, штамм 411 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест H. influenzae b (фл. № 1) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: S. pneumoniae, штамм ATCC 49619; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
- N.meningitidis тип B, штамм M5148; N.meningitidis тип С, штамм M3045 и N.meningitidis тип W135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.
Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) должен давать РАЛ с микробной взвесью S. pneumoniae штамм ATCC 49619 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест S. pneumoniae (фл. № 2) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; N. meningitidis тип A, штамм M4060;
N. meningitidis тип B, штамм M5148; N. Meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрациях 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis A (фл. № 3) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип A, штамм M4060 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип B, штамм M5148 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis B (фл. № 4) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип С, штамм M3045 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип С, штамм M3045 на 3(+)-4(+) в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis С (фл. № 5) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) должен давать РАЛ с микробной взвесью N. meningitidis тип W 135, штамм M7037 на 3(+)-4(+) в концентрации
10 9 м.к./мл.
Латексный тест N.meningitidis W 135 (фл. № 6) не должен давать РАЛ с микробными взвесями: H. influenzae тип b, штамм 411; S. pneumoniae, штамм ATCC 49619;
N. meningitidis тип A, штамм, M4060; N. meningitidis тип B, штамм M5148 и N. meningitidis тип С, штамм M3045 в концентрации 10 9 м.к./мл.
Микробные клетки возбудителей ГБМ, присутствующие в исследуемой пробе, взаимодействуют с латексными частицами, сенсибилизированными антителами против полисахаридных антигенов возбудителей ГБМ с последующим образованием видимых агглютинатов. Специфическими мишенями данного теста являются полисахаридные антигены капсул возбудителей гнойных бактериальных менингитов.
Латексная тест-система ГБМ Оболенск представляет собой набор, состоящий из 13 флаконов:
- флакон №1 (латексный тест H.influenzaeb), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену капсулы тип bHaemophilusinfluenzae тип b (HIb);
- флакон №2 (латексный тест S.pneumoniae), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Streptococcuspneumoniae;
- флакон №3 (латексный тест N.meningitidisA), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип A;
- флакон №4 (латексный тест N.meningitidisB), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип B;
(латексный тест N.meningitidisС), содержит 0,5 % взвеси частиц монодисперсного полистирольного альдегидного латекса диаметром 0,85 мкм, сенсибилизированного иммуноглобулинами G, выделенными из сывороток крови кроликов, содержащих антитела к полисахаридному антигену Neisseriameningitidis тип С;
Потенциальный риск применения Латексной тест-системы ГБМ класс 3 (Приказ МЗ РФ №4н от 06.06.2012г)
Утилизацию неиспользованных тест-систем с истекшим сроком годности проводят любым способом, предотвращающим повторное использование по назначению.
7.1.Образцы спинномозговой жидкости или крови, полученные от больных людей с подозрением на гнойный бактериальный менингит.
7.2.Колонии микроорганизмов, выделенных из клинического материала, выращенные на плотных питательных средах в микроаэрофильных условиях в течение 24-48 часов при температуре 37 °С.
Примечание – Анализируемые образцы не подвергать автоклавированию.
- Подготовка к выполнению анализа
Извлечь из холодильника Латексную тест-систему ГБМ и выдержать при комнатной температуре 20 минут.
Примечание – перед применением латексный тест тщательно суспендировать до гомогенного состояния.
Латексная тест-система ГБМ Оболенск
9.1. Анализируемый образец ( по п.7.1.) объемом по 0,02 мл, механическим дозатором 6 раз нанести на предметное стекло в виде капель, затем внести в каждую полученную каплю образца по 0,015 мл одного из специфических латексных тестов из флаконов №1-6 и оба компонента в каждой капле осторожно перемешать стеклянной палочкой (для каждой смеси отдельной палочкой) до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
9.2. Идентификация микробных клеток ГМБ ( по п 7.2.): из колоний, выросших на плотной питательной среде — на предметное стекло нанести 20 мкл физиологического раствора, стеклянной палочкой снять часть колонии тестируемого штамма (исследуемый образец) и растереть в капле физиологического раствора до получения гомогенной суспензии. Далее проводить идентификацию по п.9.1.
9.3. Проверка качества контрольного латексного теста. К 0,02 мл анализируемого образца, нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл контрольного латексного теста (флакон №13) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
9.4 Контроль специфичности латексного теста. К 0,02 мл позитивного контроля (флаконы №7-12), нанесенного на предметное стекло, добавить 0,015 мл специфического латексного теста (флаконы № 1-6) и оба компонента осторожно перемешать стеклянной палочкой до получения гомогенной суспензии. Реакционную смесь на стекле инкубировать при комнатной температуре 2 минуты, периодически покачивая, а затем регистрировать результаты реакции.
Учет результатов по п. 9.1;.9.2;.9.3. провести через 2 минуты, руководствуясь таблицей и иллюстрацией.
Таблица 1 – Интерпретация результата (Пример идентификации Haemophilus influenzae тип b)
Наличие видимой четкой окрашенной агглютинации частиц после добавления к позитивному контролю H. influenzae b (флакон №7) латексного теста H. influenzae b (флакон №1).
Латексную тест-систему ГБМ транспортируют всеми видами транспорта при соблюдении условий хранения или при температуре от 2 до 25 ºС в срок не более 7суток.
Примечание – Не замораживать.
Срок годности – 1 год. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.
Латексная агглютинация
Наборы для идентификации и дифференциации микроорганизмов из клинического материала или из чистой культуры методом латексной агглютинации.
Выпускаются в двух форматах:
1) Жидкие
Латексный реагент представлен в жидкой форме, хранение при + 2-8° С 1 год
Латексный реагент нанесен на реакционную карточку и лиофилизирован, хранение при + 2-25° С до 2 лет
Артикул
Название (русское/английское)
Фасовка
Описание
Бактериальный менингит
Набор Wellcogen на менингококковые инфекции/Wellcogen Bacterial Antigen Kit
Быстрый тест для прямого определения антигенов в жидкостях тела методом латексной агглютинации (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды):
- Streptococcus гр. B
- H. influenzae тип b
- N. meningitidis групп A, C, Y, W135
- N. meningitides гр. B/E.coli K1.
- Время реакции – 3 минуты
- Чувствительность – 97% *
- Специфичность – более 98%
- В состав набора входят все необходимые компоненты
*для Н. influenzae тип b
Набор Wellcogen для определения H. influenzae b/Wellcogen Haemophilus influenzae b Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения N. meningitidis A, C, Y, W 135/Wellcogen Neisseria meningitidis A, C, Y, W135 Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения N. meningitidis B/E. coli K1/Wellcogen Neisseria meningitidis B/E. coli K1
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения стрептококков группы B/Wellcogen Strep B Rapid Latex Agglutination Test
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Набор Wellcogen для определения Streptococcus pneumoniaе/Wellcogen Streptococcus pneumoniae Test Kit
Прямое определение антигенов в жидкостях тела (цереброспинальной жидкости, сыворотке, моче, крови, культуре с питательной среды)
Streptococcus
Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, D, F и G /PathoDxtra Strep Grouping Kit
Быстрый тест для дифференциации групп стрептококков A, B, C, D, F и G по Лансфильду с первичных чашек с культурой.
Набор для диагностики стрептококков групп A/PathoDxtra Strep Group A Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп B/PathoDxtra Strep Group B Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп C/PathoDxtra Strep Group C Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп D/PathoDxtra Strep Group D Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп F/PathoDxtra Strep Group F Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор для диагностики стрептококков групп G/PathoDxtra Strep Group G Latex
Предназначен только для использования с набором DR0700M
Набор Streptex для диагностики групп стрептококков A, B, C, D, F и G (ферментная экстракция)/Streptex
Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, D, F, G по Лансфильду с использованием ферментной экстракции
Набор для диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Rapid
Набор для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду с использованием кислотной экстракции
Набор для быстрой диагностики стрептококков групп A, B, C, F и G (кислотная экстракция)/Streptex Acid Extraction Kit
Набор для быстрой кислотной экстракции для использования с Streptex Rapid Latex Agglutination Test для идентификации стрептококков групп A, B, C, F, G по Лансфильду
Набор DrySpot для диагностики Streptococcus pneumonia/Pneumo
Сухой латексный тест для подтверждения Streptococcus pneumoniae в культурах на чашках или положительных культурах крови.
Staphylococcus и MRSA (метициллин-резистентный стафилококк)
Набор DrySpot для идентификации Staphylococcus aureus (MRSA)/Dryspot Staphytect Plus
Сухой латексный тест для идентификации S. aureus после первичного посева
Плазма кроличья для выявления коагулазы (лиофилизированная)/Coagulase Plasma (lyphohilized)
Реагент для выявления фермента коагулазы у стафилококков
Быстрый тест для подтверждения или предварительной идентификации бактерий рода Listeria с селективной плотной среды методом латекс-агглютинации. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации рода С. Difficile
Быстрый иммунологический тест для подтверждающей идентификации Clostridium difficile с селективных плотных питательных сред методом латекс-агглютинации. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации рода Salmonella
Быстрый тест для подтверждения или предварительной идентификации бактерий рода Salmonella (чистая культура с плотной питательной среды). Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации Staphylococcus aureus
Быстрый тест для подтверждения или предварительной идентификации коагулазоположительных стафилококков (в т.ч. бактерий вида Staphylococcus aureus) с первичной среды. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации Staphylococcus aureus
Быстрый тест для подтверждения или предварительной идентификации коагулазоположительных стафилококков (в т.ч. бактерий вида Staphylococcus aureus) с первичной среды. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Реагент контрольный для идентификации Staphylococcus aureus
Быстрый тест для подтверждения или предварительной идентификации коагулазоположительных стафилококков (в т.ч. бактерий вида Staphylococcus aureus) с первичной среды. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации E.coli O157
Быстрый серологический тест для подтверждающей идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки E.coli O157 (культуры с плотных питательных сред). Тест быстро отделяет серогруппу О157 от других серотипов кишечной палочки. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации легионелл
Набор реагентов для подтверждающей идентификации чистой культуры легионелл. Тест позволяет идентифицировать L.pneumophila (серогруппа 1, серогруппы 2-15) и другие виды легионелл (10 основных видов). Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для подтверждающей идентификации рода Сampylobacter
Набор предназначен для определения методом латекс-агглютинации следующих термофильных видов кампилобактерий: C. jejuni, C.coli, C.jejuni subsp doylei, C.upsaliensis, C.laridis. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Тест для дифференциации стрептококков
Набор предназначен для идентификации и дифференциации стрептококков методом латекс-агглютинации. Основная часть выделяемых стрептококков обладают специфическими групповыми антигенами. Идентификация с помощью теста латексной агглютинации включает экстракцию и характеристику этих антигенов. Набор содержит специальный ферментный реагент для быстрой экстракции углеводных антигенов и серию латексных реагентов, специфичных для A, B, C, D, F, G групп стрептококков, для быстрой детекции и идентификации экстрагированных антигенов.
Тест-кассета для скрининга на ротавируса и аденовируса
Тест предназначен для тестирования фекальных образцов на наличие ротавируса и/или аденовируса. Предназначен только для профессионального использования (in vitro диагностики).
Аннотация научной статьи по фундаментальной медицине, автор научной работы — Харитонова А. В., Аллилуев А. П., Харт С. А.
Для определения чувствительности и специфичности ACYW135, АС и А менингококковых латексных диагностикумов (ЛД) дтя выявления противомешшгококковых антител были исследованы 192 образца сывороток населения Эфиопии. В реакции латекс-агглютинации продемонстрирована высокая чувствительность и специфичность связывают разработанных ЛД с кап-сульными полисахаридами (КП). Наибольшая чувствительность ACYVV 135, АС и А серогрупп менингококковых ЛД была достигнута при использовании латекса, размер которого варьировхт от 3 до 1,2 мкм и в селсибилиз1ф>1ощей дозе 6,25 мкг/мл. Полученные данные подтвердили дизгноеттескую ценность ЛД на основе группоспецифических полисахаридов и выявит достаточно высокий уровень антител к КП серогруппы А в сыворотках населения Эфиопии, что соответствует послеэпидсмическому периоду 2003 года.
Похожие темы научных работ по фундаментальной медицине , автор научной работы — Харитонова А. В., Аллилуев А. П., Харт С. А.
Revealing the antibodies to capsular polysaccharides of meningococcus by developed ACYW 135 and AC latex diagnostics in the sera of Ethiopia population
A total of 192 samples of serum of Ethiopia population were examined in order to determine the sensitivity and specificity of ACYW135 and AC meningococcal latex diagnostics for meningococcal anlibodies detection. Latex agglutination reaction demonstrated high sensitivity and specificity of binding of the new latex diagnostics to the capsular polysaccharides. The highest sensitivity of ACYW135 and AC meningococcal latex diagnostics was achieved, when used latex with size varied from 3,0 up to 1,2 mkm and the sensitizing doze of 6,25 mkg/ml. The obtained data have confirmed the diagnostic value of latex diagnostics based on. groupspecific polysaccharides. And have revealed high level of antibodies to capsular polysaccharides serogroup A in sera Ethiopia population, that corresponds after epidemical period 2003 year.
ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИТЕЛ К КАПСУЛЬНЫМ ПОЛИСАХАРИДАМ МЕНИНГОКОККОВ РАЗРАБОТАННЫМИ АСУМУ 135, АС И А ЛАТЕКСНЫМИ ДИАГНОСТИКУМАМИ В СЫВОРОТКАХ НАСЕЛЕНИЯ ЭФИОПИИ
А.В. Харитонова, А.П. Аллилуев
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Российский университет дружбы народов Ул. Миклухо-Маклая, 8, 117198 Москва, Россия
Кафедра микробиологии и генитально-уринальной медицины Ливерпульский Университет Долби стрит, Дункан билдинг, Ливерпуль Ь69 ЗСА, Великобритания
Для определения чувствительности и специфичности АСУ\\М35, АС и А менингококковых латексных диагностикумов (ЛД) для выявления противоменингококковых антител были исследованы 192 образца сывороток населения Эфиопии. В реакции латекс-агглютинации продемонстрирована высокая чувствительность и специфичность связывания разработанных ЛД с капсульными полисахаридами (КП). Наибольшая чувствительность АСУ\\^ 135, АС и А серогрупп менингококковых ЛД была достигнута при использовании латекса, размер которого варьировал от 3 до 1,2 мкм и в сенсибилизирующей дозе 6,25 мкг/мл. Полученные данные подтвердили диагностическую ценность ЛД на основе группоспецифических полисахаридов и выявили достаточно высокий уровень антител к КП серогруппы А в сыворотках населения Эфиопии, что соответствует послеэпидемическому периоду 2003 года.
Ключевые слова: менингококковая инфекция, выявление антител, реакция латекс агглютинации.
Менингит и септицемия являются опасными инфекциями, вызывающими значительную заболеваемость и смертность. Эпидемия менингококкового менингита является большой проблемой здравоохранения в мире, наибольшее распространение зарегистрировано в Африке. В 1999 г. вспышка менингококковой инфекции наблюдалась в Гвинее-Бисау, регионе называемом менингитным поясом Африки [1]. Соответствующий чувствительный тест является необходимым для выявления наличия менингококковой инфекции (МИ) для раннего предупреждения возможности возникновения вспышки в данном регионе.
С большим успехом в последнее время используют для индикации антигенов и антител полимерные микросферы (латексы), позволяющие прочно связывать специфические антигены микробов или направленные к ним антитела [2; 3; 4; 5]. Простота, чувствительность и специфичность реакции латекс агглютинации (РЛА) при проведении скрининга больших популяций позволяет быстро и дешево выявлять людей с высоким уровнем противоменингококковых антител, защищающих их от заражения МИ. Ме-нингококковый антиген быстрее элиминируется из крови, тогда как антитела к нему
можно регистрировать в РЛА более длительное время. Ранее при использовании ЛД серологическое подтверждение диагноза на основании дополнительного выявления диагностического титра антител нами было получено в 89% случаев [10].
Целью этого исследования является выбор латекса и сенсибилизирующей рабочей дозы, соответствующих методов иммобилизации КП А, С, У, \V135 серогрупп Птепт^](1е8 антигенов на полимерные микросферы, оценка чувствительности и специфичности разработанных экспериментальных серий иммунохимических тест-систем, тестирование образцов сывороток крови населения Эфиопии э тими диагности-кумами для выявления антител к КП А, С, У, N¥135 серогрупп 1Ч.тепш^пс1е.ч.
Материалы и методы.
Частицы латекса были отмыты двукратным центрифугированием фосфатным буфером pH = 7,8. Концентрация полимерной суспензии была 1 % до сенсибилизации. Латекс был смешан в эквивалентном объеме 1 мл с выбранной концентрацией 6,25 мкг/мл менингококкового антигена. Затем для инактивации свободных групп в течение часа инкубируют суспензию в глициновом буфере при pH = 7,8. Рабочая концентрация латекса в планшете 0,05%. Несенсибилизированный латекс был взят в качестве контроля неспецифического связывания.
Зависимость чувствительности ЛД белого цвета от размера латексных микросфер и сенсибилизирующей дозы АСУ\¥135, АС, А КП
Размер, мкм Сенсибилизирующая доза, мкг/мл
1,5 6,25 12,5 25 50 100
1,2 90 9К* 95 90 80 70
3,0 90 98 95 90 80 70
Примечание: * - пул сывороток, который давал наиболее высокий процент положи-
тельных реакций с исследуемыми сенсибилизирующими дозами латексов.
Зависимость чувствительности ЛД синего цвета от размера латексных микросфер и сенсибилизирующей дозы АСУ\¥135, АС КП.
Размер, мкм Сенсибилизирующая доза, мкг/мл
1,5 6,25 12,5 25 50 100
1,2 60 70* 65 60 50 40
3,0 60 70* 65 60 50 40
Примечание: * — пул сывороток, который давал наиболее высокий процент положительных реакций с исследуемыми сенсибилизирующими дозами латексов.
Была дана оценка чувствительности, специфичности и стабильности связывания АСУ\У135, АС, А КП (табл. 1, 2). При изучении чувствительности ЛД с различными антигенами выявлен титр антител, который давал РЛА со стандартной сывороткой в зависимости от вида и размера латекса. Ранее, соответственно схеме, была показана минимальная активная концентрация (МАК), А, С, У, X, \V135 КП (которой сенсибилизировали частицы латекса), в которой сенсибилизированные частицы латекса могут быть агглютинированы сывороткой, содержащей антитела к А, С, У, X, Т, В и \V135 серогруппам К.тетг^Шс^ [2]. Рабочая доза была выше МАК и давала максимальные титры антител в РЛА. Сыворотки забирались на 1-2-й и 7-10-й дни с момента постановки диагноза МИ.
Антитела к АСУ\¥135, АС, А КП менингококков были тестированы в сыворотках 194 людей из Эфиопии. Из них (93,8%) всего 182 были мужчины. Возраст обследованных был от 17 до 65 лет.
Разработанные ЛД, полученные при иммобилизации антигена на латекс, были использованы для выявления противоменингококковых группоспецифических антител. Было проведено сравнение способности этих серий латексов связываться менингококковыми АСУ\У135, АС, А серогрупп КП. Для оценки чувствительности были взяты пулы сывороток переболевших, которые давали тигры противоменингококковых антител 1:40 и выше. Специфичность ЛД была подтверждена тем, что РЛА не выявляла антител в сыворотках других серогрупп менингококков.
Таким образом, была подобрана сенсибилизирующая концентрация КП, в которой проявляется высокая специфичность и чувствительность менингококковых тест-систем АСУ\¥135, АС, А серогрупп. Наибольшая чувствительность и специфичность ЛД была достигнута при использовании латекса, размер которого варьировал от 3,0 до 1,2 мкм и сенсибилизирующей дозе 6,25 мкг/мл АСУ\\Ч35, АС, А КП (табл. 1, 2). Менингококковые АСУ\¥135, АС и А ЛД, основанные на полимерной суспензии белого цвета, были более чувствительными и стабильными, чем синие ЛД, активность которых резко упала после 2 месяцев (табл. 1, 2, 3).
Было показано, что процент выявления антител менингококковыми ЛД, которые содержали оптимальную концентрацию 6,25 мкг/мл и размер 3,0 мкм, 1,2 мкм был более эффективен, чем тест-систем с другими концентрациями КП (см. табл. 1,2).
Стабильность ЛД белого цвета АС и АСУ\¥135 серогрупп
№ п/п Сенсибилизирующая доза на мкг/мл частиц латекса Титры АС, АСТ\¥135 антител в РЛА при храненни
1 нед. 3 мес. 6 мес. 9 мес. 1 год 1,5 года
1 1,5 3 3 2 2 1 1
2 6,25 5 5 5 5 5 5
3 12,5 5 4 4 3 2 1
4 25,0 4 4 4 3 2 1
5 50,0 3 3 3 2 2 1
6 100,0 2 1 1 0 0 0
Примечание: * — цифры обозначают логарифм обратной величины титра.
Выявление уровней антител ЛД А, АС и АСУУУОБ серогрупп
№ п/п сер. Доза АГ, м кг/мл Число обследованных — группы Средний логарифм титра*
1 6,25 72 2,34+0,12 2,47±0,32 2,52±0,35
2 6,25 50 5,85±0,24 6,21+0,34 6,1 ±0,24
3 6,25 40 4,03+0,32 4,23±0,33 4,51±0,25
4 6,25 32 8,45±0,11 8,65±0,41 8,91+0,49
Примечание: * — достоверность различий р> 0,05 в группах.
В работах Оо1(1$Ьпе1с1аг и других [6] при изучении сывороток добровольцев показано, что при использовании бактерицидных антител индивидуумы с титром циркулирующих антител более 4 были защищены от заражения МИ серогруппы С. Полученные высокие титры противоменингококковых антител мы можем объяснить тем, что эти сыворотки были собраны от людей, перенесших эпидемии в Эфиопии в 1989, 1999 гг. [7]. Высокие титры противоменингококковых антител защищают людей от заболевания и смерти при менингококковой инфекции [8]. Нами было показано ранее [10], что уровень АТ (1:40) является протективным. Полученные данные также показали наличие зависимости между присутствием бактерицидных антител в сыворотке и защиту от заражения менингококковой инфекцией (обзор РгавЬ [9]). Безусловно, имея моновакцину серогруппы А, можно установить уровень АТ у переболевших менингококковой инфекцией серогруппы А. В нашем случае, кроме моновакцины А, дивакцины А+С и тетравакцины А+С У+\¥135, выявлены аналогичные титры антител. Различие уровней противоменингококковых антител к КП, выявленных при помощи АСУ\У135, АС и А серогрупп латексных диагностикумов, в одних и тех же сыворотках, было статистически незначимым (табл. 4). Таким образом, мы можем заключить, что выявленные антитела принадлежали серогруппе А и что титруются одни и те же антитела, синтезированные к КП серогруппы А. Это помогло подтвердить серологически, что эпидемия была вызвана менингококками серогруппы А, а также установить уровень коллективного иммунитета. Так как известно, что эпидемии в Эфиопии были вызваны А серогруп-пой К.тешг^йёез [7], мы можем подтвердить это также. На основе полученных данных можно прогнозировать количество людей, которые подлежат вакцинации.
Проведенное тестирование по выявлению уровня противоменингококковых антител сывороток из Эфиопии показало высокую диагностическую ценность разработанных ЛД. Данные о превалировании противоменингококковых антител серогрупп АСУ\У135 и АС, А у населения Эфиопии в литературе отсутствуют. Таким образом, является важным выявление уровня антител до проведения вакцинации менингококковой вакциной. Как и в изучении ОоИ8]1Г^с1аг и других [6], проводится сравнение заболеваемости по возрастным группам, и мы планируем дальнейшее изучение зависимости защиты для серогрупп АСУ\У135, АС и А МИ. Предложенный метод латексной агглютинации планируется использовать для диагностики уровня противоменингококкового иммунитета в регионах с высоким риском возникновения вспышки МИ, что является важным для эпидемиологического прогноза и решения вопроса вакцинации в этом регионе.
1. Anonymous (1999) Communicable Disease Surveillance and Response (CSR). World Health Organization, Geneva.
2. Аллилуев А.П., Яшина H.B., Котельникова О.В., Харитонова А.В. и др. Полимерные окрашенные микросферы для индикации антител к капсульным полисахаридов различных серогрупп менингококков // Биомедицинские технологии. — 1996. — № 4. — С. 77-8 J.
3. Severin, W.P.J. Latex agglutination in the diagnosis of meningococcal meningitis // J. Clin. Path. — 1972. — Vol. 25. — P. 1079-1082.
4. Methods in Molecular Medicine, vol. 67: Methods and Protocols. Edited by: A.J. Pollard and M.C. J. Maiden. Humana Press Inc., Totowa, NJ.
5. Leinonen M. and Herba E. The latex agglutination test for the diagnosis of meningococcal and Haemophilus influenzae meningitis // Scand. J. Infect. Dis. — 1997. — Vol. 9.— P. 187-191.
6. Goldschneider /., Gotschlich E.C., Artenstein M.S. Human immunity to the meningococcus. I. The role of humoral antibodies // J Exp Med. — 1969.— Vol. 129 (6). — Jun 1, —P. 1307-1326.
7. Haimanot R.T., Caugant D.A., Fekadu D. et al. Characteristics of serogroup A Neisseria meningitidis responsible for an epidemic in Ethiopia, 1988-89 // Scand J Infect Dis. — 1990, —Vol. 22 (2).— P. 171-174.
8. Borrow R., Andrews N., Goldblatt D. et al. Serological basis for use of meningococcal serogroup С conjugate vaccines in the United Kingdom: revaluation of correlates of protection // Infect. Immun. — Vol. 69. — P. 1568-1573.
9. Frasch C.E. Meningococcal vaccines: past, present and future // K. Cartwright (ed.). Meningococcal disease. N.Y., John Wiley & Sons, 1995. P. 245-283.
10. Ariuiyee А.П., КС. Королева, Ю.Я. Венгеров и др. Реакция латекс-агглютинации для экстренной и ретроспективной диагностики менингококковой инфекции // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 1999. — Т. 128, —№ 11, —С. 541-544.
REVEALING THE ANTIBODIES TO CAPSULAR POLYSACCHARIDES OF MENINGOCOCCUS BY DEVELOPED ACYW135 AND AC LATEX DIAGNOSTICS IN THE SERA OF ETHIOPIA POPULATION
A.V. Kharitonova, A.P. Alliluev
Department of Medical Microbiology, Virology and Immunology Peoples’ Friendship University of Russia Miklukho-Maklaya St., 8, 117198 Moscow, Russia
Department of Medical Microbiology and Genito-Urinary Medicine University of Liverpool Duncan Building, Daulby Street, Liverpool L69 3GA, United Kingdom.
A total of 192 samples of serum of Ethiopia population were examined in order to determine the sensitivity and specificity of ACYW135 and AC meningococcal latex diagnostics for
meningococcal antibodies detection. Latex agglutination reaction demonstrated high sensitivity and specificity of binding of the new latex diagnostics to the capsular polysaccharides. The highest sensitivity of ACYW135 and AC meningococcal latex diagnostics was achieved, when used latex with si/e varied from 3,0 up to 1,2 mkm and the sensitizing doze of 6,25 mkg/ml. The obtained data have confirmed the diagnostic value of latex diagnostics based on groupspecific polysaccharides. And have revealed high level of antibodies to capsular polysaccharides serogroup A in sera Ethiopia population, that corresponds after epidemical period 2003 year.
Keywords: meningococcal infection, antibodies detection, latex agglutination reaction.
Читайте также:
