Тест-системы для ифа на клещевой энцефалит

Описание
Состав
Показания для применения
Режим дозирования и способ применения
Меры предосторожности при применении

Набор реагентов ИФА ТС АГ ВКЭ Тест-система иммуноферментная для выявления антигена вируса клещевого энцефалита (Комплект № 1) включает следующие реагенты для проведения прямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА):
ИГ - иммуносорбент – иммуноглобулин класса G (крысиный) против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) – аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабоопалесцирующая бесцветная жидкость.
КА+ - контрольный положительный образец – антиген ВКЭ, экстрагированный из ткани мозга мышей, инфицированных ВКЭ, инактивированный бетапропиолактоном -аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесци-рующая светло-желтого цвета жидкость.
КА– - контрольный отрицательный образец – антиген из ткани мозга неинфицированных мышей, аморфный порошок кремового цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая светло-желтого цвета жидкость.
Конъюгат (концентрат) – иммуноглобулин класса G против ВКЭ (крысиный), конъюгированный с пероксидазой хрена, аморфный порошок белого цвета, после растворения – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость.
КББ×20 - 20-кратный концентрат карбонатно-бикарбонатного буферного раствора для разведения ИГ – прозрачная бесцветная жидкость.
ФСБ-Т×25 – 25-кратный концентрат фосфатно-солевого буферного раствора с твином, раствор для промывания планшетов и приготовления раствора РР – прозрачная или слабо опалесцирующая бесцветная жидкость, в которой допускается выпадение кристаллов бело-го цвета, растворимых в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС.
БСА - бычий сывороточный альбумин – стабилизатор – аморфный порошок от белого до светло-желтого цвета, после растворения в ФСБ-Т – прозрачная или слабо опалесциру-ющая светло-желтого цвета жидкость.
ЦБР - буферный раствор с перекисью водорода – раствор для разведения ТМБ – про-зрачная бесцветная жидкость.
ТМБ - концентрат тетраметилбензидина – хромоген – прозрачная бесцветная жид-кость.
Планшеты полистироловые 96-луночные монолитные для ИФА.

Комплект № 1 рассчитан на одновременное проведение 192 определений, включая контрольные.

СПОСОБ ПРИМЕНЕНИЯ
Оборудование, материалы и реагенты (не включенные в состав набора), необ-ходимые для проведения анализа:
- многоканальный спектрофотометр, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;
- термостат, поддерживающий температуру (37±1) ºС;
- холодильник бытовой;
- промыватель для микропланшет, ручной или полуавтоматический;
- дозаторы (пипетки) переменного объема (механические или электронные): 8- или
12-канальные с объемом дозирования от 50 до 300 мкл и 1- канальные с объемом до-зирования от 10 до 100 мкл, от 100 до 1000 мкл и от 500 до 5000 мкл;
- наконечники для дозаторов соответствующей вместимости;
- шейкер (встряхиватель лабораторный медицинский V-3 типа вортекс);
- часы;
- бумага фильтровальная;
- перчатки резиновые хирургические;
- стаканы химические мерные или колбы мерные вместимостью 50 мл и 500 мл;
- цилиндры мерные вместимостью 25 мл, 100 мл, 500 мл;
- вода дистиллированная или вода очищенная;
- кислота серная концентрированная.
Вся посуда, используемая для постановки реакции, должна быть химически чистой и не содержать ионов тяжелых металлов. Следует избегать непосредственной близости с хлорсодержащими дезинфектантами, особенно на этапах приготовления ТМБ. Для отбора исследуемых образцов и реагентов тест-системы необходимо использовать автоматические пипетки с погрешностью измерения объёмов не более 5 %. Отбор реагентов следует произ-водить чистыми наконечниками для автоматических пипеток.

Подготовка исследуемого материала.

Обработка клещей.
Для испытания в ИФА пригодны лишь неповрежденные клещи. Клещей однократно промывают 70 % спиртом этиловым и 2-3 раза 0,9 % раствором натрия хлорида. Каждого клеща помещают в пробирку для микропроб вместимостью 0,5-1,5 мл, маркируют и хранят до исследования при температуре не выше минус 20 ºС не более 2 недель. Перед испытани-ем в ИФА готовят 10 % суспензию клеща: его растирают металлическим стержнем в той же пробирке, добавляют 0,2 мл РР (см. п. 4.4). Клеща, насосавшегося крови, растирают, добавляя РР в количестве, равном его объёму. Для ИФА берут 0,1 мл суспензии, остаток пробы хранят в той же пробирке и тех же условиях, что и клещей не более 2 недель.

Подготовка крови.
Кровь забирают из вены шприцем в количестве 2-5 мл, переносят в стерильную про-бирку, выдерживают 30-50 мин при температуре 37 оС или 1-2 ч при температуре 18-25 ºС для образования сгустка, затем центрифугируют 15-20 мин при 1500-2000 об/мин. Сыво-ротку отсасывают и помещают в стерильную пробирку, сгусток крови растирают в асепти-ческих условиях, добавляя равное ему по объёму количество РР. Затем центрифугируют при том же режиме, что и кровь. Надосадочную жидкость переносят в стерильную пробир-ку.
Приготовленные пробы маркируют и хранят до исследования при температуре от 2 до 8 оС не более 1 недели или при температуре не выше минус 20 ºС не более 3 мес. В зависимости от цели исследования в ИФА могут быть испытаны как неразведенные пробы сывороток и сгустков крови, так и в разведениях (например, от 1:2 до 1:8).

Подготовка мозговой суспензии.
Для исследования мозга инфицированных животных (или мозговой ткани людей, взятой в случае летального исхода) необходимо приготовить 1 % мозговую суспензию на РР. Суспензию центрифугируют при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин, надосадочную жидкость переносят в стерильную пробирку, маркируют и хранят до исследования также как пробы крови. В ИФА проверяют как неразведенную суспензию, так и в разведении 1:10 и выше.

Подготовка культуральной жидкости.
Культуральную жидкость зараженных клеточных культур перед испытанием в ИФА освобождают от клеток центрифугированием при 3000-6000 об/мин в течение 20-30 мин. В ИФА исследуют как неразведенные пробы, так и в разведении 1:2 и более.
Подготовка растворов и реагентов (для проведения анализа на одном планшете).

Набор перед использованием необходимо выдержать не менее 30 мин при температу-ре от 18 до 25 °C.

Раствор для разведения ИГ (КББ).
0,5 мл КББ×20 разводят в 9,5 мл воды очищенной или дистиллированной (далее воды). Хранение: неиспользованный концентрат КББ×20 хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Иммуносорбент (ИГ).
Рабочее разведение ИГ указано на ампуле.
Содержимое ампулы с ИГ растворяют в 1 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 оС), затем разводят в КББ (см. п. 4.1) до разведения, указанного на ампу-ле (например: 1:20 – 0,5 мл ИГ и 9,5 мл КББ).
Хранение: неиспользованный растворенный ИГ хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 7 сут.

Раствор для промывания планшетов и приготовления РР (ФСБ-Т).
Содержимое флакона с концентратом ФСБ-Т×25 разводят в 480 мл воды. В случае вы-падения осадка концентрат ФСБ-Т×25 предварительно прогревают в течение 20-30 мин при температуре 37 ºС до полного растворения осадка.
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 2 сут или при температуре не выше минус 10 оС не более 14 сут.

Рабочий раствор (РР) для разведения образцов, конъюгата, КА+, КА–.
В 50 мл ФСБ-Т (см. п. 4.3) растворяют навеску 0,5 г стабилизатора БСА (время рас-творения 20 мин при помешивании при температуре 20-25 ºС).
Хранение: при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 7 сут.

Подготовка контрольных образцов.
Содержимое ампул с КА+ и КА– растворяют в 0,5 мл воды (время растворения 1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем готовят рабочее разведение каждого контрольного образ-ца в РР (см. п. 4.4) так, как указано на ампуле (например: 1:200 – 0,01 мл антигена и 2 мл РР).
Хранение: неиспользованные растворенные контрольные образцы хранят при темпе-ратуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут (рекомендуется разлить на аликвоты в микропробирки для исключения повторного замораживания-оттаивания).

Рабочее разведение конъюгата.
Содержимое ампулы с конъюгатом растворяют в 0,5 мл воды (время растворения
1,5 мин при температуре 20-25 ºС), затем разводят на РР (см. п. 4.4) так, как указано на ам-пуле (например: 1:40 – 0,25 мл конъюгата и 9,75 мл РР). Рабочее разведение конъюгата го-товят не ранее чем за 30 мин до использования.
Хранение: оставшийся не использованным растворенный конъюгат хранят при температуре от 2 до 8 ºС не более 1 сут или при температуре не выше минус 10 ºС не более 14 сут.

Подготовка рабочего раствора ТМБ.
Рабочий раствор хромогена готовят непосредственно перед использованием, соединяя 2,5 мл концентрата ТМБ и 10 мл ЦБР (разведение 1:5), тщательно перемешивают. Смесь готовят в чистой посуде, избегая контакта раствора с металлом, воздействия интенсивного источника света и близости с хлорсодержащими веществами.
Хранение: при температуре 18-25 ºС не более 15 мин в защищенном от света месте.
4.8. Стоп-реагент (кислота серная концентрации 2 моль/л) в набор не включен, гото-вится дополнительно: к 9 мл воды добавляют 1,2 мл концентрированной кислоты серной.

Проведение иммуноферментного анализа.

Внесение контрольных и исследуемых образцов.
В две лунки планшета вносят по 100 мкл КА+ (в рабочем разведении), в три лунки – КА– (в рабочем разведении), в две лунки – по 100 мкл раствора РР – контроль конъюгата.
В остальные лунки планшета (кроме 12А) вносят по 100 мкл исследуемых образцов. Планшет закрывают и помещают на 1-2 ч при температуре (37±1) ºС или на 18-25 ч при температуре от 2 до 8 ºС, после чего планшеты промывают (см. п.5.1).

Внесение конъюгата.
В каждую лунку планшета, кроме 12А, вносят по 100 мкл раствора конъюгата в рабочем разведении. Планшет закрывают и помещают на 45-60 мин при температуре (37±1) ºС, затем отмывают 5 раз, остатки влаги удаляют (см. п.5.1).

Внесение хромогена и стоп-реагента.
Во все лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора ТМБ. Планшет выдерживают в защищенном от света месте при температуре 18-25 ºС в течение 5-7 мин до появления интенсивного голубого окрашивания в лунке с КА+, после чего в лунки вносят по 50 мкл стоп-реагента (п. 4.8).

Клещевой вирусный менингоэнцефалит может протекать в особо тяжелых формах, вплоть до летального исхода. На первой стадии развития болезни он схож с другими опасными заболеваниями, такими как клещевой боррелиоз, острый полиомиелит, серозный менингит, сыпной тиф, японский комариный энцефалит. Поэтому крайне важна ранняя дифференциальная диагностика, позволяющая однозначно установить истинную причину нарастающих симптомов. Необходимость дифференцировать вирусный энцефалит и боррелиоз объясняется также тем, что эти два заболевания характерны для одних и тех же регионов и возникают они после присасывания клеща в весенне-летний период.

Если при нахождении в эндемичном регионе вы обнаружили на теле клеща, следует незамедлительно провести лабораторные исследования биоматериала, а в случае положительного результата — принять экстренные меры в ближайшие 4 суток после укуса насекомого, обратившись к инфекционисту или терапевту. В нашем обзоре мы рассмотрим, какие методы диагностики существуют и какие показатели анализов на энцефалит и боррелиоз являются сигналом к безотлагательным действиям.

Боррелиоз и энцефалит: что это и в каких случаях следует сдать анализ на наличие инфекции

Среди десятков заболеваний, переносчиками которых являются клещи, двумя — энцефалитом и боррелиозом (болезнью Лайма) — можно заразиться, не покидая территории России. Эти инфекционные болезни часто путают, а между тем, они совершенно разные. Клещевой энцефалит имеет вирусное происхождение, а клещевой боррелиоз — бактериальное. Оба заболевания поражают ЦНС, но болезнь Лайма — также суставы, кожный покров, сердечную мышцу. Энцефалит протекает преимущественно в острой форме, боррелиоз склонен к хронизации. Энцефалит оставляет устойчивый и продолжительный иммунитет, болезнь Лайма вызывает замедленный иммунный ответ с каскадным развитием аутоиммунных реакций, поэтому следующее заражение боррелиозом возможно уже спустя 7 лет. По мере развития каждая болезнь приобретает собственные ярко-выраженные симптомы.

По мере развития вируса происходят постепенные, зачастую необратимые изменения в сосудах и оболочках мозга. Первые две недели болезнь протекает бессимптомно. К 3-й неделе появляются высокая температура, головная и мышечная боль, тошнота, отсутствие аппетита. У четверти заболевших эти симптомы возникают еще позднее, спустя месяц после заражения. С течением времени боли усиливаются. Появляются судороги, паралич конечностей, дезориентация, потеря сознания, кома. При отсутствии помощи — летальный исход.

В зависимости от преобладания тех или иных симптомов, различают несколько форм течения клещевого энцефалита. Наиболее тяжелые, очаговые, формы чаще встречаются на территории Дальнего Востока, наиболее легкие, неочаговые, формы превалируют в центрально-европейской части России (см. табл. 1).

Таблица 1 . Клинические формы течения клещевого энцефалита

Клиническая форма	Тяжесть	Течение	Прогноз
Неочаговые формы
•Стертая	Легкая форма	Острое	Полное выздоровление
•Лихорадочная	Средней степени		Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Менингеальная	Тяжелая форма		Выздоровление с неврологическим дефицитом
Очаговые формы
•Энцефалитическая	Средней степени	Острое	Полное выздоровление
•Менингоэнцефалитическая	Средней степени	Первично-хроническое	Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Полиоэнцефалитическая	Тяжелая форма	Вторично-хроническое	Выздоровление с неврологическим дефицитом
•Полиомиелитическая		Стабильное	Хронизация
•Полиоэнцефаломиелитическая		Прогредиентное (с нарастанием симптоматики)	Летальный исход
•Полирадикулоневритическая		Прогредиентное (с нарастанием симптоматики)	Летальный исход

Через месяц появляются признаки поражения нервной системы: дефекты речи, частичный паралич конечностей, перепады в настроении. У некоторых больных развивается менингит, нарушаются сердечные ритмы. Если болезнь оставить без внимания, через год начнет прогрессировать потеря слуха, артрит, невралгия, сильная затрудненность речи, потеря ориентации в пространстве.

Боррелиоз хорошо лечится, и главное в этом деле — не допустить перехода заболевания в диссеминированную (распространенную, рассеянную) или хроническую стадию (см. табл. 2). Больному назначают антибиотики на протяжении 2–4 недель, своевременный прием которых практически гарантирует полное выздоровление.

Таблица 2 . Клинические стадии и формы болезни Лайма

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита – это специфические противовирусные белки-иммуноглобулины, вырабатываемые иммунной системой в ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита и свидетельствующие о текущей либо перенесенной инфекции или об успешной вакцинации.

При положительном результате указывается концентрация обнаруженных антител, а также титр.

Антитела класса IgG к вирусу клещевого энцефалита (Encephalitis virus), иммуноглобулины класса G к вирусу клещевого энцефалита.

Синонимы английские

Anti-arboviral Encephalitis IgG, Encephalitis Virus Antibodies, IgG, Tick-borne encephalitis virus IgG (TBE virus IgG).

Иммуноферментный анализ (ИФА).

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Клещевой энцефалит – это сезонное (весенне-летнее) вирусное заболевание, передающееся в основном с укусом клещей; поражает преимущественно центральную нервную систему.

Возбудитель клещевого энцефалита относится к арбовирусам, семейству флавивирусов, и подразделяется на три подвида: дальневосточный, центральноевропейский и сибирский. Основной переносчик энцефалита – иксодовые клещи. Кроме того, он передается через птиц, грызунов и хищников. Инкубационный период в среднем составляет 3-7 суток. Клинические проявления болезни разнообразны. Выделяют лихорадочную, менингеальную, менингоэнцефалитическую, полиомиелитическую и полирадикулоневритическую формы заболевания. Возможно длительное вирусоносительство в виде латентной, персистентной или хронической инфекции.

В ответ на инфицирование вирусом клещевого энцефалита или на вакцинацию против этого вируса иммунной системой вырабатываются специфические противовирусные антитела – белки-иммуноглобулины. Иммуноглобулины класса G возникают в крови спустя неделю после появления первых симптомов, достигают максимума через 1,5-2,5 месяца с момента инфицирования и сохраняются на протяжении всей жизни, обеспечивая стойкий иммунитет.

Для чего используется исследование?

Для подтверждения диагноза "клещевой энцефалит" (как текущего, так и недавно перенесенного заболевания).
Чтобы оценить иммунитет после перенесенного клещевого энцефалита или после вакцинации против него.
Как часть дифференциальной диагностики при поражении центральной нервной системы (инфекционных менингитах и энцефалитах другого происхождения, эпилепсии, асептическом менингите, тромбозе артерий или вен головного мозга, инсульте, внутричерепном кровоизлиянии, фебрильных судорогах, ВИЧ, цистицеркозе, саркоидозе, сифилисе, карциноматозе мозговых оболочек, паранеопластическом энцефаломиелите и др.).

Когда назначается исследование?

При подозрении на текущий или перенесенный клещевой энцефалит.
При проведении вакцинации против клещевого энцефалита.

Что означают результаты?

Концентрация: 0 - 100 Ед/мл.

Причины положительного результата

Наличие активного иммунитета вследствие ранее перенесенной инфекции или вакцинации (если тест на IgM к вирусу клещевого энцефалита отрицательный).
Текущий или недавно перенесенный клещевой энцефалит (в сочетании с положительным тестом на IgM к вирусу клещевого энцефалита) при условии, что не проводилась вакцинация.
Недавно проведенная вакцинация против вируса клещевого энцефалита.

Четырехкратное нарастание титра IgG-антител в парных сыворотках (в остром периоде инфекции и периоде выздоровления), а также повышение уровней IgG и IgM указывает на наличие клещевого энцефалита. Повышение титра IgG после введения вакцины свидетельствует о ее успешности.

Причины отрицательного результата

Отсутствие недавнего инфицирования и, соответственно, иммунного ответа на вирус (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются). Если есть подозрение на инфекцию, целесообразно назначить повторные анализы на IgM и IgG через 7-10 дней.
Ранние стадии клещевого энцефалита (если уровень IgM повышен).
Слабый иммунный ответ (или его отсутствие) на клещевой энцефалит вследствие нарушений иммунной системы (если IgM к вирусу клещевого энцефалита не выявляются).

Что может влиять на результат?

Наличие перекрестно-реагирующих антител к другим возбудителям рода флавивирусов (вирус лихорадки Западного Нила, вирус японского энцефалита и др.).

Профилактикаклещевого энцефалита осуществляется двумя способами. Во-первых, это вакцинация, которая проводится при риске заражения клещевым энцефалитом, а во-вторых, ревакцинация по эпидемическим показаниям перед сезоном клещевого энцефалита.
Тем, кто лечился гамма-глобулином в первые дни болезни, через 2-3 месяца необходимо дополнительное серологическое исследование в связи с тем, что такая терапия временно угнетает формирование иммунитета.

Вирус клещевого энцефалита, IgM
Вирус клещевого энцефалита, антиген (в ликворе)
Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
Лейкоцитарная формула
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
Белок общий в ликворе
Глюкоза в ликворе

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, терапевт, врач общей практики.

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА)

Клещевой энцефалит – трансмиссивное вирусное заболевание с выраженной сезонностью, зависящей от периода активности иксодовых клещей, и природной очаговостью. Около 70% всех случаев клещевого энцефалита в РФ приходится на Урал и Сибирь. В преобладающей части случаев клещевой энцефалит протекает в инаппарантной форме, в остальных случаях развиваются различные по степени тяжести варианты течения заболевания: лихорадка, вирусные менингит и энцефалит. В большинстве случаев после очаговой энцефалитической формы развиваются стойкие нарушения деятельности ЦНС.

Иммуноглобулины класса IgM в сыворотке пациентов выявляются с первых дней после начала заболевания. Наибольшей концентрации IgM достигают в первые 10 дней болезни. Антитела класса IgG появляются со второй недели от начала заболевания и в максимальных титрах могут сохраняться в течение 2-6 месяцев. (Согласно СП 3.1.3310-15 Профилактика инфекций, передающихся иксодовыми клещами).

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование лиц с клиническими симптомами при наличии эпидемиологического анамнеза (выезд в лесные и лесопарковые зоны, присасывание клеща)

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Отрицательный результат серологических тестов на ранних стадиях заболевания не является доказательством отсутствия инфекции. Для подтверждения этиологии заболевания рекомендуется выявление нарастания титров антител к вирусу клещевого энцефалита в образцах крови, взятых в динамике (парные сыворотки).

" ["serv_cost"]=> string(3) "705" ["cito_price"]=> NULL ["parent"]=> string(2) "25" [10]=> string(1) "1" ["limit"]=> NULL ["bmats"]=> array(1) < [0]=>array(3) < ["cito"]=>string(1) "N" ["own_bmat"]=> string(2) "12" ["name"]=> string(31) "Кровь (сыворотка)" > > ["within"]=> array(1) < [0]=>array(5) < ["url"]=>string(71) "serologicheskaja-diagnostika-borrelioza-i-kleshhevogo-encefalita-300052" ["name"]=> string(115) "Серологическая диагностика боррелиоза и клещевого энцефалита" ["serv_cost"]=> string(4) "2385" ["opisanie"]=> string(6872) "

Метод исследования: Иммуночип, иммуноферментный анализ (ИФА).

Диагностика ИКБ выполняется с помощью уникальной диагностической тест-системы в формате иммуночипа с флуоресцентной детекцией. Это значительно повышает эффективность диагностики и информативность результатов исследования в сравнении с данными, полученными с применением метода иммуноферментного анализа (ИФА). Тест позволяет одновременно определять в исследуемом образце антитела к 8 группам диагностически значимых антигенов боррелий видов Borrelia afzelii и Borrelia garinii (p100 В.garinii, p100 В. B.afzelii, VlsE B.garinii, VlsE B.afzelii, p39 B.afzelii, p41 B.garinii, p41 B.afzelii, p58 B.afzelii, BBK32 B.garinii, BBK32 B.afzelii, OspC B.garinii, OspC B.afzelii, p17 B.garinii, p17 B.afzelii), наиболее распространенных в РФ, и одновременно дифференцировать их по классам антител: IgM и IgG. Использование комбинации из нескольких рекомбинантных белков разных видов боррелий позволяет повысить чувствительность и специфичность теста.

Антитела класса IgM при ИКБ начинают обнаруживаться на 10-14-й дни болезни. Образование специфических антител IgM у инфицированных лиц обычно предшествует появлению антител IgG. Однако у некоторых больных синтез антител IgM может задерживаться или отсутствовать вообще. При раннем боррелиозе с целью установления сероконверсии важно исследовать парные сыворотки, полученные от пациентов с интервалом в 20–30 дней. Наличие антител IgМ к антигенам боррелий в сыворотке крови больных Лайм-боррелиозом, как правило, указывает на раннюю стадию инфекции. В некоторых случаях антитела IgM могут выявляться в течение 1–2 лет и более. Антитела класса IgG появляются на 14-21-й дни болезни и в более поздние сроки. Важно отметить: специфические антитела IgG могут выявляться в течение длительного периода времени (несколько лет). Долго они сохраняются также и после успешно проведенной антибиотикотерапии. Наличие специфических антител IgG к возбудителям ИКБ не исключает повторного заражения инфекцией.

Диагностика КЭ выполняется методом иммуноферментного анализа – определение антител к вирусу КЭ используется для подтверждения клинического диагноза, а также проведения дифференциальной диагностики с другими инфекционными заболеваниями (гриппом, лептоспирозом и т.д.). Антитела класса IgМ к вирусу КЭ можно обнаружить на 4-5 день от начала заболевания, антитела класса IgG – на 10-14-й дни болезни. Доказательством свежей инфекции служит одновременное определение специфических антител IgM и IgG или нарастание титра специфических IgG в парных сыворотках, взятых у пациента с интервалом 10-14 дней. После перенесенного клещевого энцефалита вырабатывается стойкий иммунитет. Однако, самый эффективный способ защиты от клещевого энцефалита – это вакцинопрофилактика (плановая, либо экстренная). После проведения вакцинации вырабатываются специфические антитела IgG, которые могут либо полностью защитить от заболевания КЭ, либо болезнь будет протекать в более легкой форме.

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Диагностика клещевых инфекций – клещевого боррелиоза (болезни Лайма) и/ или клещевого энцефалита.

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

" ["catalog_code"]=> string(6) "300052" > > >

Не менее 3 часов после последнего приема пищи. Можно пить воду без газа.

Метод исследования: иммуноферментный анализ (ИФА)

ПОКАЗАНИЯ К ИССЛЕДОВАНИЮ:

Обследование лиц с клиническими симптомами при наличии эпидемиологического анамнеза (выезд в лесные и лесопарковые зоны, присасывание клеща)

ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ:

Референсные значения (вариант нормы):

Клинические анализы имеют основополагающее значение в постановке диагноза при клещевом энцефалите. У больного берут венозную кровь или спинномозговую жидкость, которую исследуют разными методами. Наиболее информативными считаются ИФА, ПЦР и иммуноанализ, позволяющие с высокой вероятностью определить факт заражения. Рассмотрим подробнее когда и где сдать кровь на антитела к вирусу igg. Какие показатели считаются нормой, вирус igg положительный что это значит, а так же сколько по времени делаются анализы.

Иммуноферментное исследование крови (ИФА)

Анализ основывается на выявление специфических антител (иммуноглобулинов) к возбудителю клещевого энцефалита – IgM и IgG. Они начинают вырабатываться иммунной системой в ответ на активность вируса заболевания или введение вакцины. Метод ИФА ценится за то, что позволяет определить не только факт заражения, но и стадию болезни. Материал для исследования – венозная кровь больного.

Иммуноглобулины IgM вырабатываются вместе с начальными симптомами клещевого энцефалита, через 3,5-4,5 недель их концентрация достигает пика, после чего снижаются на протяжении нескольких месяцев.

Антитела IgG обнаруживаются в крови пациентов через неделю после появления симптоматики, после чего их количество нарастает и достигает максимума спустя 1,5-2,5 месяца. Впоследствии они сохраняются в крови на протяжении всей жизни, обеспечивая стойкий иммунитет. Биологический материал для исследования у пациента обычно берут несколько раз с интервалом в несколько недель, чтобы определить рост концентрации антител в динамике.

При расшифровке результатов анализов используется понятие защитный титр, которое означает концентрацию определенных антител в образце биоматериала. Титр может иметь следующий вид – 1:100, 1:400, 1:1000 и т.д.

Иногда анализ отражает количество иммуноглобулинов в крови человека, которое измеряется в Ед/мл. Нормой (отрицательным результатом) обычно считается показатель от 0 до 100 Ед/мл, а любые цифры выше 100 требуют дополнительных исследований.

Референсные значения (нормы) показателей анализов могут отличаться в зависимости от лаборатории, поэтому расшифровкой должен заниматься специалист.

Как правило, повышение титра антител IgM выше нормы свидетельствует о ранних стадиях заболевания, а IgG – о выздоровлении или недавно перенесенного вируса. Обнаружение обоих видов антител в крови обычно свидетельствует о том, что человек заражен вирусом клещевого энцефалита в острой форме.

Кроме того, увеличение концентрации иммуноглобулинов наблюдается после проведенной вакцинации и свидетельствует о том, что процедура прошла эффективно. На ранних стадиях возможны отрицательные результаты исследования, а в некоторых случаях (неправильно проведенный анализ, наличие других арбовирусов в крови) – ложноотрицательные. Отсутствие обоих видов антител в организме свидетельствует о том, что пациент здоров и никогда не болел клещевым энцефалитом.

ВАЖНО! Общие и биохимические анализы крови не считаются информативными при диагностике клещевого энцефалита, но их проводят для оценки общего состояния организма. Для заражения характерно снижения количества лейкоцитов и тромбоцитов, невыраженное повышение печеночных ферментов.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Диагностика с помощью полимеразной цепной реакции, или ПЦР – прямой метод, который позволяет выявить наличие ДНК или РНК вируса клещевого возбудителя в крови. Материал для анализа – венозная кровь, реже у пациентов берут ликвор, слюну или другие биологические жидкости.

Метод ПЦР имеет преимуществами перед другими диагностическими процедурами, так как позволяют выявить возбудителя с достаточно высокой точностью. Для проведения исследования не требуется большое количество биологического материала, а результаты анализов можно получить в кратчайшие сроки. ПЦР позволяет диагностировать хронические, затяжные и серонегативные формы заболевания, которые тяжело выявить с помощью других видов исследований.

Исследование ПЦР имеет свои особенности, которые следует учитывать при диагностике. В первые 1-4 суток после попадания вируса в организм его можно обнаруживать в 54% случаев, с 5 по 10 день вероятность выявления возбудителя снижается до 9%, а на 11-20 день снова возрастает до 25%. После 20-го дня после заражения обнаружить инфекцию в крови крайне трудно – это можно сделать только в 6% случаев.

Метод ПЦР используется не только для исследования биологических жидкостей больного, но и для проверки паразита. Анализ позволяет выявить возбудителей заболевания в организме клеща – если насекомое стерильно, дальнейшие обследования укушенного, как правило, не требуются.

СПРАВКА! Обычно метод ИФА и ПЦР рекомендуется использовать в комплексе, так как результаты анализов крови, выполненных разными методами, позволяют увидеть полную и точную картину болезни.

Иммуноанализ

Для определения инфекций, которые передаются укусами клещей, используются хемилюминесцентный анализ и иммуноблот (вестерн-блот). Для получения точных результатов они, как правило, используются в комплексе.

Хемилюминесцентный анализ основывается на тех же принципах, что и ИФА, но обладает более высокой точностью. Он позволяет определить содержание антител к возбудителю клещевого энцефалита, а точность составляет 95%.

Иммуноблот назначается в случаях, когда пациента необходимо проверить на наличие инфекции при получении отрицательных результатов остальных исследований. Например, анализы показывают, что вирус в организме отсутствует, но у больного наблюдаются явные признаки заражения.

Остальные обследование

Помимо вышеперечисленных методов, в диагностике клещевого энцефалита используется вирусологическое исследование крови и спинномозговой жидкости, а также анализ ликвора. В случае лихорадочной формы течения изменения в биоматериале отсутствуют. При менингеальной и некоторых других разновидностях заболевания наблюдается лимфоцитарный плеоцитоз (увеличение количества лимфоцитов) и повышение концентрации белка. Примеси гноя в спинномозговой жидкости свидетельствуют о том, что у пациента развивается менингит, а не клещевой энцефалит.

В качестве дополнительных исследований при диагностике болезни используются следующие методы:

реакция связывания комплемента;
реакция прямой гемагглютинации;
реакция торможения гемагглютинации;
реакция нейтрализации.

Они отражают изменения, которые происходят в организме при вирусных заболеваниях, и позволяют точно оценить клиническую картину.

СПРАВКА! У небольшого количества людей иммунная система справляется с возбудителем клещевого энцефалита самостоятельно, поэтому больной может не знать о факте заражения. В этом случае в его крови будет выявлен определенный титр антител, который свидетельствует о пожизненном иммунитете.

Лечение заболевания

Терапия клещевого энцефалита проводится в стационаре, схема лечения зависит от стадии заболевания и общего состояния больного. Специфических средств против болезни не существует, поэтому пациентам назначается этиотропная, поддерживающая и симптоматическая терапия.

На начальных стадиях (обычно до появления первых симптомов) в качестве лечения используются иммуноглобулины – клетки, которые получают из крови доноров.

Они эффективно борются с возбудителями клещевого энцефалита, но положительных результатов можно достичь только при раннем введении препаратов.

Если симптомы болезни уже проявились или она перешла во вторую стадию, лечение проводится с помощью противовирусных средств – рибонуклеазы, препаратов или индукторов интерферона. В качестве симптоматической терапии используются дезинтоксикационные средства, глюкокортикостероиды, нейролептики, антиспастические, противосудорожные лекарства. При серьезных бульбарных расстройствах больных переводят на искусственную вентиляцию легких.

Прогноз при клещевом энцефалите зависит от общего состояния человека и своевременности терапии – чем раньше она будет начата, тем лучше. Большинство пациентов излечиваются без последствий для здоровья, но иногда возможны необратимые изменения в организме и серьезные осложнения. В их число входят параличи, парезы, атрофия мышц и нарушения работы нервной системы.

Полезное видео

Ознакомьтесь подробно на видео о анализах при клещевом энцефалите:

Клещевой энцефалит – тяжелое заболевание, которое может стать причиной инвалидизации больного или даже летального исхода. Чтобы предотвратить неприятные последствия, нужно придерживаться простых профилактических правил – во время прогулок на природе защищать руки и ноги одеждой, носить головной убор, использовать репелленты. Людям, проживающим в эпидемиологически неблагоприятных районах, рекомендуется пройти вакцинацию, которая надежно защищает от заражения вирусом.

Читайте также: