Защитный титр антител при полиомиелите

Полиомиелит – острое вирусное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы, часто с развитием тяжелых осложнений. Возбудитель полиомиелита – энтеровирус. Данный тест позволяет определить концентрацию IgG-антител к вирусу полиомиелита.

IgG-антитела к вирусу полиомиелита, антитела к вирусу полиомиелита.

Синонимы английские

Детский спинномозговой паралич, спинальный детский паралич, болезнь Гейне - Медина.

Твердофазный иммуноферментный анализ.

Ед/мл (единица на миллилитр).

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Полиомиелит (детский спинномозговой паралич, спинальный детский паралич, болезнь Гейне-Медина) – острое вирусное заболевание, характеризующееся поражением нервной системы, часто с развитием тяжелых осложнений. Возбудитель полиомиелита – энтеровирус, поражает в основном детей до 5 лет. На сегодняшний день известны три типа вирусов, патогенных для человека: тип 1, тип 2 и тип 3.

Вирус распространяется при прямых контактах от человека к человеку при контакте с инфицированной слизью носоглотки или с инфицированными фекалиями (фекально-оральный и воздушно-капельный механизм передачи). Он проникает в организм человека через слизистую оболочку носоглотки или кишечника. Во время инкубационного периода вирус размножается в лимфоидных тканях глотки и кишечника, затем распространяется моноцитами по кровеносной и лимфатической системе в другие лимфатические узлы, где тоже размножается и достигает нервных клеток во второй фазе виремии. В более чем 90 % случаев пациент не страдает от каких-либо субъективных симптомов. В остальных случаях появляется неспецифическое заболевание с небольшим повышением температуры, болезненными ощущениями в области головы и горла, диареей, тошнотой и рвотой и очень редко с классическим мышечным параличом и поражением церебральных нервов. Фаза реконвалесценции может длиться до двух лет, часто остаются длительные повреждения.

Более 90% инфицированных пациентов не испытывают каких-либо субъективных симптомов. В остальных случаях могут быть жалобы на головную боль, воспаление горла, диарею, тошноту и рвоту, повышение температуры тела. Очень редко наблюдаются классические парализации с болями в мышцах и нервах спинного мозга. Восстановительный период может длиться до двух лет, но полученные повреждения устранить, часто не удаётся.

Известно три вида патогенных для человека вирусов полиомиелита: тип 1 (Brunhilde) - зачастую с серьезными симптомами, тип 2 (Lansing) - с умеренными симптомами, тип 3 (Leon) - редкий, но с тяжелыми симптомами. Различают непаралитическую и паралитическую формы полиомиелита. Факторами риска являются отсутствие иммунизации против полиовируса при контакте с возбудителем, путешествия в районы, в которых были отмечены вспышки полиомиелита (в некоторых странах Азии и в Нигерии полиомиелит по-прежнему является эндемичным заболеванием, но ВОЗ выполняет проект по ликвидации этой болезни; в Европе бывают случаи заболевания, связанные с туризмом в опасные регионы). В местах вспышек заболевания наибольшей опасности заражения подвергаются преимущественно дети до 10 лет (60-80 % заболеваний приходится на детей в возрасте до 4 лет), беременные женщины и люди старшего возраста. Заболевание чаще фиксируется летом и осенью (максимум в августе - октябре). Диагноз устанавливается на основании клинической симптоматики, эпидемиологических предпосылок и данных лабораторного исследования (исследование СМЖ; выделение вируса из смывов, полученных из глотки, образцов кала или СМЖ в течение инкубационного периода вируса; выявление антител к полиовирусу).

В эндемичных районах продолжают циркулировать только вирусы типа 1 и 3. Оба вируса высококонтагиозны, оба вызывают паралитический полиомиелит. Тип 1 является наиболее распространенным штаммом вируса, распространенность типа 3 является низкой.

Для чего используется исследование?

• Выявление IgG-антител к вирусу полиомиелита.

Когда назначается исследование?

Защитные уровни противополиомиелитных антител

Человек считается защищенным от заболевания, вызванного каким-либо отдельным типом полиовируса, если у этого человека произошла выработка типоспецифических нейтрализующих антител. Однако до сих пор окончательно не установлены титры сывороточных нейтрализующих антител, которые обеспечивали бы защиту от инфекции. В экспериментах на животных было показано, что пассивный перенос антител, сопровождающийся появлением антител в умеренных титрах (1:20 и выше), обеспечивает защиту от заболевания. Однако эти результаты нельзя экстраполировать на человеческую популяцию, в которой циркулируют дикие или вакцинные штаммы полиовируса.

Исследования, проведенные в 50-е годы, показали, что лица с низкими титрами нейтрализующих антител в сыворотке крови могут быть реинфицированы диким вирусом полиомиелита. Это было подтверждено результатами наблюдении за 237 людьми с естественным иммунитетом к полиомиелиту и титрами нейтрализующих антител 1:40 и ниже во время семейных вспышек полиомиелит в Луизиане в 1953—1957 гг. Случаи реинфекции, доказанные четырехкратным повышением титров сывороточных антител, были зарегистрированы у 98% обследованных. В противоположность этому из 36 человек с титрами нейтрализующих антител 1:80 к выше случаи реинфекции были отмечены только у 33% обследованных.

Результаты недавних исследований в Японии и Великобритании показали, что у людей с низкими поствакцинальными титрами сывороточных нейтрализующих антител после заражения вакцинным штаммом полиовируса может развиваться реинфекция. В Японии при наблюдении в течение 5 лет за 67 детьми, привитыми двумя дозами трехвалентной ППВ, у 19 детей титры антител к полиовирусу 1-го типа были 1:8 и ниже. После введения разрешающей дозы ППВ у 18 из 19 детей этой группы развилась реинфекция, на что указывало выделение вируса полиомиелита с фекалиями. В Великобритании исследование было проведено в группе из 97 детей, которым через 8—16 лет после иммунизации в раннем детстве тремя дозами тривалентной ППВ вводили новую (“разрешающую”) дозу той же вакцины. У 17 детей этой группы до введения новой дозы вакцины титры антител ко всем трем серотипам полиовируса были низкими (ср. геом. титров антител колебались от 1:9 до 1:36). Хотя число детей в этой группе слишком невелико, чтобы делать статистически достоверные выводы, тем не менее следует отметить, что из 8 детей без иммунного ответа на введение новой дозы вакцины у семерых титры нейтрализующих антител составляли 1:32 и выше. В то же время у детей, ответивших сероконверсией на введение новой дозы, титры антител до вакцинации были низкими.

Эти данные совпадают с результатами ранее проведенных исследований, которыми было показано, что дети с низкими титрами сывороточных антител могут быть повторно инфицированы вакцинным штаммом полиовируса. Эти исследования наводят на мысль, что люди с низкими, но все-таки определяемыми титрами сывороточных антител не имеют повышенной опасности развития клинически выраженных форм полиомиелита. Однако они могут быть реинфицированы вирусом полиомиелита и служить в качестве источников инфекции для людей, которые не были иммунизированы.

ДжСолк высказал мнение, что пожизненный иммунитет к полиомиелиту может быть индуцирован введением одной дозы инактивированной полиомиелитной вакцины (ИПВ), которой ребенок должен быть привит в возрасте от 5 до 7 месяцев. Однако со времени этой публикации появились сообщения о случаях паралитического полиомиелита у людей, получивших одну или несколько доз ИПВ с усиленной активностью (уИПВ). Более того, было установлено, что защитная эффективность одной дозы уИПВ (39%) почти эквивалентна уровню нейтрализующих антител, индуцированных однократным введением этой вакцины.

Обратите внимание
Консультация у врача — залог вашего здоровья. Не пренебрегайте личной безопасностью и всегда обращайтесь к доктору вовремя.

Защитный титр антител при полиомиелите

Изобретение относится к новой медицинской биотехнологии и может быть использовано в инфекционных стационарах, как экспресс-метод определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей.

Полиомиелит представляет собой острое инфекционное заболевание, которое поражает нервную систему и за считанные часы может привести к общему параличу, остановке дыхания и летальному исходу. Возбудитель полиомиелита (Poliovirus hominis) относится к семейству Picornaviridae, роду Enterovirus и представлен тремя серотипами: I тип — штамм Брунгильд, II тип — штамм Лансинг и III тип — штамм Леон. Наиболее эпидемически значимым считается I тип, который чаще всего способен вызывать развитие параличей. II тип имеет несколько штаммов и также является довольно распространенным. Реже всего обнаруживается III тип. Вирус полиомиелита передается при попадании в желудочно-кишечный тракт веществ, загрязненных инфицированным калом, например воды. Вероятность инфицирования полиомиелитом из таких источников особенно высока у детей младше 5 лет. После инфицирования вирус распространяется из кишечника по всему организму, но наиболее сильно поражается головной и спинной мозг. Вакцинация против полиомиелита включена в перечень обязательных детских прививок. Вакцин от полиомиелита на сегодняшний день две. Обе они вполне эффективны против имеющихся штаммов. Одна из них представляет собой инактивированные вирусные частицы, другая — просто ослабленные. Попав в организм, вирусные частицы вызывают иммунный ответ. В системе приобретенного иммунитета основную роль играют В-лимфоциты, которые продуцируют антитела. Антитела взаимодействуют с поверхностью вируса и могут с ним связываться.

Несмотря на заверения ВОЗ, полиомиелит еще нельзя считать побежденным. И одним из фактов, подтверждающим данное заключение, является то, что многие погибшие от вируса полиомиелита, вызвавшего вспышку в Конго, были привиты от полиомиелита, но вакцинация им не помогла. Вирус стал неуязвимым, и ученые Европы нашли у него необычную мутацию, которая привела к замене аминокислоты в вирусном белке VP1, и поэтому новый вирус не нейтрализовался сывороткой здорового человека, то есть мог вызвать заболевание.

Одним из путей решения актуальнейшей проблемы, поставленной ВОЗ по ликвидации полиомиелита в мире, является разработка вирусологических подходов к экспрессной диагностике определения уровня антител в крови к вирусу полиомиелита 1, 2 и 3 типов у детей, прошедших вакцинацию или в спорных случаях.

Известен способ определения антител к полиомиелиту в крови (Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962). В данном источнике предлагают выявлять малоавидные и высокоавидные антитела к полиомиелиту в реакции цветной пробы. Принцип данного теста заключается в том, что в результате жизнедеятельности клеток в питательной среде накапливаются кислые продукты. В результате цвет входящего в состав среды индикатора (фенолового красного) становится оранжевым. При заражении культуры клеток цитопатогенными вирусами, метаболизм клеток подавляется, рН среды и ее цвет не изменяются (она остается красной). При положительном результате противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток, и под действием кислых метаболитов последних в среде меняется цвет индикатора. Однако данный метод требует ведения клеточной культуры, что удорожает проведение исследования, отсутствие специального оборудования и специалистов делает невозможным его проведение, а также не является экспрессным методом и не обеспечивает точности определения.

Также существенным недостатком является стоимость набора и его производство за рубежом.

Принцип ее состоит в том, что при взаимодействии антигена (вируса) с гомологичными антителами образуется комплекс антиген + антитело, в результате нейтрализуется инфекционность вируса. Этой смесью заражают чувствительную к вирусу культуру клеток. Результат нейтрализации вируса учитывают по отсутствию цитопатического действия (ЦПД) в культуре клеток. Недостатками данного способа является большая трудоемкость; необходимость строгого соблюдения стерильности материалов, посуды и инструментов; высокая стоимость живых биологических систем; длительность проведения исследования. Определение антител данным методом сопряжено с ведением клеточных культур, что не обеспечивает экпрессность метода.

С целью устранения вышеуказанных недостатков авторы предлагают принципиально новый способ определения антител к вирусам полиомиелита 1, 3 типов в сыворотке крови, технический результат которого заключается в повышении точности и экспрессивности определения антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови. Это достигается тем, что в сыворотку крови в модифицированной реакции связывания комплемента вносят убитый антиген вируса полиомиелита, содержащийся в инактивированной полиомиелитной вакцине, и гемолитическую сыворотку, исследуемые образцы выдерживают 3-4 часа при t°+4°C, а затем проводят количественное определение оксидазных ферментов, вышедших из гемолизированных эритроцитов, используя 0.05% тетраметилбензидин, и по степени лизиса эритроцитов спектрофотометрически по цветовому показателю определяют наличие антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов. Авторами впервые предложен эффективный лабораторный экспресс-способ определения антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей. Метод имеет ряд отличий и преимуществ. Обнаружение антител у детей к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови по одной пробе позволяет провести раннюю оценку проводимой вакцинации у детей с определением серотипов полиовируса.

Способ обеспечивает его проведение в любом стационаре, оснащенном лабораторией ИФА, что позволяет судить о проводимой вакцинации, а также получать сведения о проведенной иммунизации у мигрантов и кочующих групп населения. Проведенные исследования могут предотвратить развитие вспышек полиомиелита в РФ. Авторы решили эту задачу, заявляя способ экспрессного определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови у детей с помощью модифицированной реакции связывания комплемента с последующим цифровым учетом антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов.

Предложенный способ базируется на оригинальной модификации, заключающейся в том, что за его основу была принята не стандартная реакция связи вируса с антителами, закрепленными на твердой матрице, а высокочувствительная разновидность реакции сорбции комплемента на иммунный комплекс, образующийся в жидкой фазе реакции. Данный комплекс образовывался между убитыми антигенами вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащимся в инактивированной полиомиелитной вакцине и соответствующими антителами, присутствующими в сыворотке крови у детей. Остаток не сорбированного на комплекс комплемента учитывался при помощи спектрофотометрической аппаратуры. Цифровой учет остаточного комплемента стал возможным благодаря тому, что при лизисе эритроцитов, которые являются основой визуального тестирования результатов РСК, в жидкостную фазу реакции выходит группа оксидазных ферментов, таких как пероксидаза мембран, различные оксидазы и гемоглобин, находящиеся во внутренней структуре эритроцитов. Эти ферменты достаточно легко определяются с помощью оптического тестирования после контакта их с 0.05% тетраметилбензидина. Учет результатов проводится спектрофотометрически.

Авторами установлено, что внесение в лизат эритроцитов раствора стандартного 0.05% препарата тетраметилбензидина резко увеличивает показатель оптической плотности, что создает условия для точного учета минимальных концентраций антител и калибровки проводимой реакции. Точный подбор концентрации эритроцитов в гемолитической системе, состоящей из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, показал, что для создания оптической плотности в пределах 0,300-0,500 оптических единиц (длина волны 495 нм) необходимо использовать 0,1% взвесь эритроцитов барана.

Таким образом, основной принцип экспрессного теста по обнаружению антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов заключался в следующем.

Авторы обнаружили, что при добавлении к сыворотке антигенов вируса полиомиелита, содержащихся в инактивированной полиомиелитной вакцине и, затем, комплемента, образуется комплекс антиген + антитело + белки системы комплемента. После добавления гемолитической системы лизис эритроцитов барана, а следовательно, выход в раствор оксидазных ферментов, замедлялся и при добавлении 0.05% тетраметилбензидина и перекиси водорода цифровой показатель экстинции был минимален. Если сыворотка крови не содержала антитела к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа, то при аналогичном проведении исследования комплекса не образовывалось. После добавления гемолитической системы происходил лизис эритроцитов барана, под действием не связавшихся белков комплемента, сопровождавшийся массивным выходом оксидазных ферментов, и после добавления 0.05% тетраметилбензидина величина экстинции увеличивалась.

Основным преимуществом данного способа является постановка контроля для исследуемых биологических проб. Проводилось исследование без добавления убитых антигенов вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащихся в инактивированной полиомиелитной вакцине. Если в испытуемом материале присутствовали антитела к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов и в опытной пробе происходило образование комплекса, который и ограничивал выход оксидазных ферментов, то в контрольной группе, из-за отсутствия антител, находящихся в диагностикумах, такой комплекс не образовывался и препятствий для массового выхода оксидазных ферментов не наблюдалось, а соответственно величина экстинции всегда была больше.

При отсутствии в обоих случаях антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов не происходило образование комплексов и величины экстинции практически не отличались друг от друга.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

— контроль физ. р-ра, внесенный в объеме 0,4 мл;

— контроль комплемента, включающий в себя 0,1 мл физ. р-ра и 0,1 мл комплемента;

— контроль для системы выявления не сорбированного комплемента, куда вносились 0,2 мл физ. р-ра и 0,2 мл гемолитической системы;

— контроль сыворотки крови, который вносился в объеме 0,05 мл с добавлением 0,05 мл физ. р-ра;

— контроли убитых антигенов вируса полиомиелита 1 и 3 типа, содержащихся в инактивированной полиомиелитной, куда вносилось по 0,05 мл физ. р-ра и 0,05 мл данной вакцины.

После контакта данной смеси ингредиентов, проходившей в течение 60 минут при 37°С, для осуществления дальнейшего хода реакции во все лунки, где проходит опыт по определению наличия или отсутствия антител к полиомиелиту 1 и 3 типа и контролям к нему, вносилась система для выявления свободного комплемента. Такая система приготавливалась ex terpore и состояла из оттитрованных эритроцитов барана, так как каждая партия сильно разнилась от предыдущей, и процентное соотношение выбиралось, исходя из 300-500 единиц оптической плотности и гемолитической сыворотки в разведении 1:300. Реакция экпозировалась при +4°С в течение 2 часов для осуществления лизиса и осаждения не гемолизированных эритроцитов. По истечении 2 часов из надосадочной жидкости, образовавшейся после оседания эритроцитов, во всех опытных и контрольных лунках отбиралось по 50 мкл для проведения заключительного этапа — цифровой дифференцировки наличия антител к полиомиелиту 1 и 3 типа. Отобранная жидкость помещалась в отдельные полистироловые панели, куда добавлялось по 50 мкл 0.05% тетраметилбензидина для учета не сорбированного на эритроциты барана комплемента. Через 10 минут реакция останавливалась путем добавления 0,1 мл 1 нормальной H₂SO₄.

Учет реакции проводился сразу после добавления кислоты, так как не исключалась возможность дальнейшего продолжения гемолиза в контрольных и опытных образцах, влекущего за собой изменение цветности реакции, а следовательно, и изменения достоверности полученных результатов. Опыт учитывался на любом иммуноферментном анализаторе. Полученные результаты расшифровывались в сопоставлении всех контролей с исследуемым материалом. Наименьшее цифровое значение, выявляемое в одной из лунок, где находился обследуемый материал и определенная сыворотка, констатировал присутствие у больного антител вирусу полиомиелита соответствующего типа.

Таким образом, в течение одних суток, без использования тканевых культур, оказалось возможным обнаруживать антитела к вирусу полиомиелита в сыворотке крови с определением его серопринадлежности.

В примере 1 приведены результаты обследования сыворотки крови больного С.А., находящегося в клинике института и прошедшего иммунизацию в декретированные сроки (11 лет) направленного на определение антител к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа в связи с отъездом в эндемичный район.

20.02.2017. Анализ №2 Планшет №1

В примере 2 приведены результаты обследования сыворотки крови больного С.А. (3 мес) для определение антител к вирусу полиомиелита 1 и 3 типа.

20.02.2017. Анализ №3 Планшет №1

Заключение: У обследуемого пациента отсутствуют как материнские, так и собственные антитела к вирусам полиомиелита I и II типа. В декретированные сроки необходимо проведение иммунизации.

Способ имеет большую медико-социальную значимость, отличается простотой и доступностью не требует дорогостоящих тест-систем и оборудования. Основным значением данного способа является возможность точного обнаружения наличия антител вирусов полиомиелита, что позволяет провести раннюю оценку проводимой вакцинации у детей с определением серотипов полиовируса. Способ обеспечивает его проведение в любом стационаре, оснащенном лабораторией ИФА, что позволяет судить о проводимой вакцинации, а также получать сведения о проведенной иммунизации у мигрантов и кочующих групп населения. Проведенные исследования могут предотвратить развитие вспышек полиомиелита в РФ. Предлагаемый авторами способ определения антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов в сыворотке крови может стать не только общедоступным, но и экспрессным, поскольку его проведение занимает 4-5 часов.

Способ определения антител к вирусам полиомиелита 1, 3 типов в сыворотке крови, отличающийся тем, что в сыворотку крови в модифицированной реакции связывания комплемента вносят убитый антиген вируса полиомиелита, содержащийся в инактивированной полиомиелитной вакцине, и гемолитическую сыворотку, исследуемые образцы выдерживают 3-4 часа при t° +4°C, затем проводят количественное определение оксидазных ферментов, вышедших из гемолизированных эритроцитов, используя 0.05% тетраметилбензидин, и по степени лизиса эритроцитов спектрофотометрически по цветовому показателю определяют наличие антител к вирусам полиомиелита 1 и 3 типов.

с момента утверждения

3.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

ОРГАНИЗАЦИЯ И ПРОВЕДЕНИЕ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА

СОСТОЯНИЯ КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ УПРАВЛЯЕМЫХ

ИНФЕКЦИЙ (ДИФТЕРИЯ, СТОЛБНЯК, КОРЬ, КРАСНУХА,

ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПАРОТИТ, ПОЛИОМИЕЛИТ)

1. Разработаны: Департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России (к.м.н. Г.Ф.Лазикова); Федеральным центром госсанэпиднадзора Минздрава России (А.А.Ясинский, В.Н.Садовникова, Е.А.Котова); Московским научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н.Габричевского МЗ РФ (д.м.н. Н.М.Максимова, к.м.н. С.С.Маркина, д.б.н. Н.Т.Тихонова, к.м.н. Г.В.Игнатьева, к.м.н. А.Г.Герасимова, к.м.н. Д.К.Садыкова, к.м.н. О.В.Цвиркун); Центральным научно-исследовательским институтом эпидемиологии МЗ РФ (д.м.н. Т.С.Селезнева, д.м.н. Н.С.Титова, к.м.н. А.И.Заргарьянц); Институтом полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН (к.м.н. В.Б.Сейбиль); Московским научно-исследовательским институтом вирусных препаратов (д.м.н. Н.В.Юминова, д.м.н. Р.Г.Десятскова); Омской Государственной медицинской академией (проф., д.м.н. В.В.Далматов).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Министерстве здравоохранения Российской Федерации (протокол N 16 от 25 декабря 2003 года).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г.Онищенко 5 октября 2003 г.

4. Введены впервые.

1. Область применения

1.1. В Методических указаниях изложены основные принципы организации и осуществления серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета против управляемых инфекций (дифтерия, столбняк, корь, краснуха, эпидемический паротит, полиомиелит).

1.2. Настоящие Методические указания предназначены для специалистов органов и учреждений государственной санитарно-эпидемиологической службы, а также могут быть использованы специалистами лечебно-профилактических учреждений.

2. Общие положения

Серологический мониторинг состояния коллективного иммунитета населения страны является обязательным элементом эпидемиологического надзора за дифтерией, столбняком, корью, краснухой, эпидемическим паротитом и полиомиелитом. Его роль представляется чрезвычайно важной, поскольку эпидемическое благополучие в отношении указанных инфекций определяется состоянием поствакцинального иммунитета. Мониторинг осуществляется путем серологических исследований сывороток крови привитых людей.

Серологический мониторинг включает:

- подбор индикаторных групп населения, характеризующих состояние специфического иммунитета, что позволяет экстраполировать полученные результаты на население обследуемой территории в целом;

- оценку эффективности проведенной иммунизации.

Целью серологического мониторинга является оценка состояния индивидуального, коллективного иммунитета на конкретной территории, уровня фактической защищенности от инфекций в отдельных возрастных группах населения, а также оценка качества прививочной работы.

Серологический мониторинг состояния коллективного иммунитета населения осуществляется учреждениями государственной санитарно-эпидемиологической службы и лечебно-профилактическими учреждениями.

Проведение серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета оформляется совместным приказом лечебно-профилактического учреждения и центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора, в котором определяются территории, время (график), контингенты и численность групп населения, подлежащих обследованию, а также лица, ответственные за организацию и проведение этой работы.

3. Материалы и методы

Материалом для исследования служит сыворотка крови, которая является источником комплексной информации о наличии спектра антител к возбудителям указанных заболеваний.

Применяемые при мониторинге методы исследования сывороток должны быть безвредными, специфичными, чувствительными, стандартными и доступными для массовых обследований. Такими в настоящее время в Российской Федерации являются:

1) реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) - для выявления антител к дифтерийному и столбнячному анатоксину;

2) иммуноферментный анализ (ИФА) - для выявления антител к вирусам кори, краснухи и эпидемического паротита;

3) реакция нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток ткани (макро- и микрометод) - для выявления антител к вирусу полиомиелита.

Для оценки фактической привитости детей и взрослых против дифтерии и столбняка сыворотку крови исследуют параллельно с дифтерийным и столбнячным антигенными диагностикумами, т.к. прививки проводят ассоциированными препаратами. При дифтерии и столбняке защищенными от этих инфекций являются лица, в сыворотке крови которых определяются антитоксические антитела в титре 1:20 и выше.

Серопозитивными к вирусам кори, краснухи и эпидемического паротита являются лица, в сыворотке крови которых определяются специфические IgG антитела.

Для исключения ошибки метода и выявления истинно серонегативных результатов повторно исследуют сыворотки крови, в которых не обнаружены специфические антитела к возбудителям дифтерии, столбняка, кори, краснухи, эпидемического паротита.

О напряженности коллективного иммунитета к полиомиелиту и качестве вакцинопрофилактики можно судить на основании трех показателей.

Процент лиц с антителами к вирусу полиомиелита типов 1, 2 и 3.

Серопозитивными считаются сыворотки, у которых титр антител равен или выше 1:8. Процент таких сывороток рассчитывается отдельно для каждого серотипа вируса полиомиелита.

Процент трижды серонегативных лиц.

Серонегативными считаются сыворотки, в которых в разведении 1:8 отсутствуют антитела ко всем трем типам вируса полиомиелита. Рассчитывается их процент во всей группе обследованных сывороток.

Средняя геометрическая величина титра антител, которая рассчитывается только для группы сывороток, имеющих антитела к соответствующему серотипу полиовируса в титре 1:8 и выше. Титры антител переводят в логарифмы с основанием 2, суммируют и делят на число сывороток с антителами (см. Прилож. 1).

Результаты серологического обследования контингентов вносятся в рабочие журналы лабораторий, где регистрируется наименование населенного пункта, учреждения, фамилия, инициалы, возраст обследуемого и титр антител. Результаты также вносятся в учетные формы (историю развития ребенка, амбулаторную карту больного).

4. Методические подходы к отбору групп населения

При формировании групп населения, подлежащих серологическому обследованию, следует придерживаться следующих принципов.

Единство места получения прививки (лечебно-профилактические, детские образовательные учреждения, школы и т.д., где проводили прививки).

Этот принцип формирования групп позволяет выявить учреждения с низким качеством организации прививочной работы, а при последующем тщательном расследовании определить конкретные ее дефекты (нарушение правил хранения, транспортирования вакцин, фальсификация прививок, их соответствие срокам и схемам существующего календаря профилактических прививок, технические дефекты и другие причины).

Единство прививочного анамнеза.

Обследуемая группа населения должна представлять собой однородную статистическую совокупность, для чего необходим отбор лиц с одинаковым числом прививок и сроком от момента проведения последней прививки.

Сходство эпидемиологической ситуации, в условиях которой формируются обследуемые группы.

Для осуществления требований этого принципа формирование групп проводится из коллективов, в которых в течение одного года не регистрировались случаи заболеваний дифтерией, столбняком, корью, краснухой, эпидемическим паротитом. Выборка контингентов для обследования начинается с определения территорий, на которых планируется обследование.

Границы территории определяются сферой обслуживания того или иного лечебно-профилактического учреждения. Это может быть отдельный организованный коллектив детей и взрослых, врачебный участок, населенные пункты, приписанные к ФАП, территория обслуживания одной поликлиники.

Серологический мониторинг целесообразно проводить на крупных территориях в субъектах Российской Федерации (городах, районных центрах) ежегодно (каждый год в обследование включаются разные районы и поликлиники города, районного центра), а на территории районов субъекта Российской Федерации - по графику, один раз в 6-7 лет.

Для обследования следует выбрать 4 коллектива одной возрастной группы (по 2 коллектива от двух лечебно-профилактических учреждений), не менее 25 человек в каждом коллективе, т.е. не менее 100 человек в каждой индикаторной группе.

В детских коллективах перед серологическим обследованием медицинские работники должны провести разъяснительную работу с родителями о необходимости профилактики указанных инфекций и определения напряженности поствакцинального иммунитета к ним.

Сыворотки крови взрослых для исследования можно брать на станциях переливания крови без учета прививочного анамнеза доноров.

5. Индикаторные группы населения, подлежащие серологическому

обследованию на наличие специфических антител

Серологический мониторинг состояния коллективного иммунитета предусматривает многоцелевое серологическое обследование на каждой территории "индикаторных" групп населения. Дети должны иметь документально подтвержденные сведения о прививочном анамнезе. При этом срок, прошедший от последней прививки до обследования на наличие дифтерийных и столбнячных антител, антител к вирусам кори, краснухи, эпидемического паротита, полиомиелита, должен составлять не менее 3 месяцев.

В индикаторные группы нельзя включать переболевших дифтерией, столбняком, корью, краснухой, эпидемическим паротитом и полиомиелитом; детей, у которых отсутствуют сведения о прививках; не привитых против этих инфекций; перенесших какое-либо заболевание за 1-1,5 месяца до обследования, т.к. некоторые болезни могут привести к временному снижению титра специфических антител.

Состояние иммунитета к дифтерии, столбняку, к вирусам кори, краснухи, эпидемического паротита, полиомиелита у взрослых определяется без учета данных о прививках.

Введение "индикаторных" групп позволяет унифицировать формы и методы анализа прививочной работы. В настоящее время целесообразно выделять следующие индикаторные группы (табл. 1).

ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКОГО МОНИТОРИНГА СОСТОЯНИЯ

КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА К ИНФЕКЦИЯМ, УПРАВЛЯЕМЫМ

СРЕДСТВАМИ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

1-2 года
3-4 года
9-10 лет

23-25 лет
30 лет и
старше

Дифтерия и столбняк

По результатам серологического обследования детей в возрасте 3-4 лет можно судить о формировании базисного иммунитета, в возрасте 16-17 лет - о качестве прививок, проводимых в школе и средних учебных заведениях; у взрослых - о фактическом уровне защищенности от дифтерии и столбняка.

Корь, паротит, краснуха

По результатам серологического обследования детей в возрасте 3-4 лет и 9 - 10 лет судят об уровне и напряженности противокоревого, противопаротитного и противокраснушного иммунитета в ближайшие сроки после вакцинации и ревакцинации.

Серологическое обследование детей в возрасте 16-17 лет позволяет оценить результативность ревакцинации в отдаленные сроки, а также уровень иммунной прослойки к этим инфекциям во вновь формирующихся коллективах средних и высших учебных заведений.

Результаты обследования взрослых в возрасте 23-25 лет характеризуют состояние специфического иммунитета среди молодого взрослого населения, в т.ч. при краснухе - женщин детородного возраста.

По результатам серологического обследования детей в возрасте 1-2, 3-4, 14 лет судят об уровне и напряженности иммунитета к полиомиелиту в ближайшие сроки после вакцинации и ревакцинации живой полиомиелитной вакциной, у взрослых - о фактическом состоянии иммунитета к полиомиелиту.

По усмотрению эпидемиологов серологическое обследование при рассматриваемых инфекциях может быть проведено и в других возрастных группах.

6. Оценка эффективности и качества проведенных прививок

Оценка состояния специфического иммунитета населения к дифтерии, столбняку, кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту осуществляется по результатам серологического обследования индикаторных групп населения.

Выявление в каждой обследуемой группе не более 10% лиц с титром дифтерийных и столбнячных антител менее 1:20 и взрослых не более 20% лиц с отсутствием защитных титров дифтерийных и столбнячных антител служит показателем достаточной защищенности от дифтерии и столбняка.

Критериями эпидемического благополучия при кори принято считать выявление в каждой индикаторной группе не более 7% серонегативных лиц.

Среди привитых против паротита доля серонегативных не должна превышать 15% у однократно и 10% - у двукратно привитых, а доля серонегативных среди привитых против краснухи должна составлять не более 4%.

Выявление в каждой обследуемой группе не более 20% серонегативных к каждому из трех серотипов вируса полиомиелита служит показателем достаточной защищенности от полиомиелита.

При выявлении в какой-либо индикаторной группе более:

- 10% лиц с титром дифтерийных и столбнячных антител ниже защитного уровня, или

- 7% лиц, серонегативных к вирусу кори, или

- 15% лиц, однократно привитых против паротита, и более 10% - двукратно, или

- 20% лиц, серонегативных к каждому из трех серотипов вируса полиомиелита, следует осуществить нижеперечисленные мероприятия.

1. Выявить причины низкого уровня иммунитета:

- провести анализ прививочных документов на выявленных серонегативных лиц для установления факта наличия прививки - сопоставить сведения о прививках во всех учетных формах (карта профилактических прививок, история развития ребенка, амбулаторная карта больного, рабочие журналы и прочие);

- оценить условия хранения и транспортирования вакцин, порядок проведения иммунизации.

2. Дополнительно проверить состояние иммунитета к этим инфекциям у лиц того же возраста в количестве не менее 100 человек, но в двух других учреждениях (детских дошкольных, школах, домах ребенка и т.д.) того же лечебно-профилактического учреждения, где выявлен высокий процент серонегативных лиц.

Если после дополнительного обследования количество незащищенных к дифтерии, столбняку, кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту будет превышать приведенные критерии, следует решать вопрос о тактике иммунопрофилактики в данных коллективах.

Для этого необходимо обследовать лиц других возрастных групп по усмотрению эпидемиолога. Если доля серонегативных к соответствующим возбудителям среди этих лиц не будет превышать вышеприведенные показатели, то дополнительным прививкам в обследуемых коллективах подлежат лица того возраста, где выявлен высокий процент серонегативных к вирусам кори, краснухи, эпидемического паротита, полиомиелита, и лица с титром дифтерийных и столбнячных антител ниже защитного уровня.

Если процент серонегативных среди обследованных окажется значительно выше приведенных критериев, то следует решать вопрос о дополнительных прививках всем лицам, медицинское обслуживание которых осуществляется данным лечебно-профилактическим учреждением.

Если выявлены коллективы с высоким процентом серонегативных лиц, относящиеся к двум лечебно-профилактическим учреждениям, то для оценки прививочной работы в данном районе необходимо провести серологическое обследование индикаторных групп в других учреждениях (детских дошкольных, школах и т.д.) этого района. Вопрос расширения профилактических мероприятий в территории необходимо согласовать с Департаментом госсанэпиднадзора Минздрава России.

Данные о низкой защищенности от дифтерии подтверждаются результатами исследования иммунитета к столбняку. Так, высокий процент привитых против дифтерии и столбняка в учетных документах в сочетании с высоким процентом лиц с титром антител менее 1:20 не только к дифтерии, но и к столбняку свидетельствуют о недостоверности записей о прививках.

Высокий процент лиц, защищенных от дифтерии, в сочетании с низким уровнем иммунитета к столбняку не является результатом проведения профилактических прививок, а свидетельствует об их инфицировании возбудителем дифтерии (больные или носители). Отсутствие при этом регистрируемой заболеваемости дифтерией может быть обусловлено плохой работой по выявлению больных, особенно легкими формами заболевания (недостаточный объем бактериологических обследований больных с диагнозом ангина, нарушение правил взятия и доставки материала для бактериологического исследования; некачественная работа бактериологической лаборатории - отсутствие высеваемости даже нетоксигенных коринебактерий дифтерии и др.).

Если при обследовании взрослых в одной из возрастных групп число серонегативных к дифтерии превышает 20%, необходимо увеличить число обследованных в той же возрастной группе. Если число серонегативных вновь превышает 20%, необходимо провести анализ прививочной работы с целью выявления непривитых и провести их иммунизацию.

Материалы серологического мониторинга состояния коллективного иммунитета обобщаются по учреждениям разного типа, поликлиникам, району и субъекту Российской Федерации в целом (табл. 2). Далее по каждой инфекции результаты серологического обследования сопоставляют с показателями заболеваемости и уровнем охвата прививками, что позволяет подтвердить официальные данные об иммунизации населения или выявить различия в охвате прививками и уровне заболеваемости.

О РЕЗУЛЬТАТАХ ПРОВЕДЕНИЯ МОНИТОРИНГА СОСТОЯНИЯ

КОЛЛЕКТИВНОГО ИММУНИТЕТА ПРОТИВ ДИФТЕРИИ, СТОЛБНЯКА, КОРИ,

КРАСНУХИ, ЭПИДЕМИЧЕСКОГО ПАРОТИТА И ПОЛИОМИЕЛИТА