Антитела к аквапорину 4 при рассеянном склерозе

Антитела к аквапорину 4 – аутоагрессивные белковые комплексы, воздействующие на водопроводящие каналы центральной нервной системы и экспрессированные на плазматической мембране астроцитов. Анализ применяется в неврологической практике для диагностики оптикомиелита, рецидивирующих форм поперечного миелита и неврита зрительного нерва, а также для контроля течения и эффективности лечебных мероприятий при этих заболеваниях. Исследуемым материалом является сыворотка венозной крови. Определение anti-AQP4 выполняется при помощи реакции непрямой иммунофлуоресценции. При отсутствии патологий титр не превышает 1:10. Подготовка результатов теста может занимать до 11 дней.

Аквапорин 4 – интегральный белок, образующий водные каналы на клеточной мембране отростков астроцитов, стенок сосудов. Обеспечивает водный обмен между кровеносной и нервной системой, является частью гематоэнцефалического барьера. Наибольшие скопления определяются в спинном мозге, в области гипоталамуса. Антитела к аквапорину 4 (NMO-IgG, anti-AQP4) вырабатываются иммунной системой, циркулируют в цереброспинальной жидкости и крови, нарушают водно-электролитные обменные процессы. В результате повышается проницаемость гематоэнцефалического барьера, воздействие иммунных комплексов приводит к воспалению. Нервные волокна повреждаются и демиелинизируются, развивается оптикомиелит (ОМ, болезнь Девика). Исследование NMO-IgG – высокоспецифический маркер данной патологии. Ограничением являются длительные сроки подготовки результата.

Показания

Anti-AQP4 определяются у 60-90% пациентов с нейрооптикомиелитом. Как начальные стадии болезни рассматриваются продольный, обширный и частичный поперечный миелит, изолированный неврит зрительного нерва, при которых АТ выявляются в 30-50% случаев. Высокая чувствительность и специфичность теста определяют следующие показания:

Диагностика оптикомиелита, дифференциация с рассеянным склерозом. Исследование назначается при характерных симптомах: снижении остроты зрения, появлении скотом, боли в орбитах, развитии нижнего парапареза, тетрапареза, спастической мышечной гипертонии, нарушения чувствительности части тела, расположенной ниже уровня поражения спинного мозга.
Дифференциальная диагностика миелита. Основание для назначения исследования – жалобы на боль в области позвоночника и ее иррадиацию, парез, снижение/отсутствие чувствительности в ногах и выше, нарушение тазовых функций. Проводится дифференцировка аутоиммунного миелита с инфекционным, интоксикационным, травматическим.
Дифференциальная диагностика неврита зрительного нерва. Характерные признаки – снижение остроты зрения, появление слепых участков, боли в области глазницы. Наличие АТ определяет аутоиммунное происхождение патологии.
Мониторинг течения болезни Девика, контроль эффективности терапии. Количество NMO-IgG коррелирует с активностью заболевания, по изменению показателя теста оценивается прогресс и регресс патологических процессов.

Подготовка к анализу

При определении АТ в крови забор биоматериала выполняется из вены. Правила подготовки к процедуре:

После приема пищи должно пройти 4-8 часов. Пить воду разрешено в любое время.
Не употреблять алкоголь, отказаться от тяжелой физической нагрузки за день до исследования.
Не сдавать кровь после физиотерапевтических процедур и инструментальных обследований.
Избегать эмоционального стресса в течение предшествующих суток.
Сообщить врачу о принимаемых лекарствах за 1-2 недели до анализа.
Не курить за 30-60 минут до процедуры.

Забор крови выполняется методом пункции. Биоматериал помещается в пустую пробирку или в пробирку с разделительным гелем. Доставляется в лабораторию в специальных боксах. Перед анализом кровь центрифугируют, из полученной плазмы удаляют факторы свертывания. Уровень NMO-IgG определяют в сыворотке. Метод исследования – реакция непрямой иммунофлуоресценции. Сроки подготовки результатов составляют 11 рабочих дней.

Нормальные значения

В норме титр антител к аквапорину 4 не превышает 1:10. Показатель одинаков для всех пациентов вне зависимости от пола и возраста. Важные замечания относительно результатов:

Концентрация anti-AQP4 не подвержена влиянию физиологических факторов.
Нормальный результат не исключает наличия оптикомиелита, 40-10% пациентов с этим заболеванием не имеют АТ.
Положительный результат не является достаточным критерием ОМ, необходимо наличие характерных клинических признаков, положительных результатов магнитно-резонансной томографии, отсутствие данных в пользу других аутоиммунных патологий со схожей симптоматикой.

Повышение значения

Причиной повышения концентрации антител к аквапорину 4 могут стать следующие заболевания:

Болезнь Девика. АТ приводят к воспалению зрительного нерва, поражению спинного мозга. Увеличение концентрации anti-AQP4 при мониторинге заболевания свидетельствует о прогрессивном течении, неэффективности терапии.
Продольный/поперечный миелит. Предшествует развитию ОМ в 20% случаев.
Оптический неврит аутоиммунного происхождения. Патология в 80% случаев является начальной стадией оптического нейромиелита. NMO-IgG провоцируют воспаление одного или обоих зрительных нервов.
Заболевания, переходящие в оптический нейромиелит. Описаны случаи, когда развитию ОМ предшествовали аутоиммунные заболевания и инфекции.
Рассеянный склероз. Повышение уровня АТ определяется в 1-2% случаев.

Снижение значения

Снижение концентрации anti-AQP4 имеет прогностическое значение при мониторинге оптикомиелита, отслеживании эффективности лечения. Количество NMO-IgG сокращается на фоне применения иммуносупрессоров.

Лечение отклонений от нормы

Антитела к аквапорину 4 – это аутоантитела, которые направлены против белков водопроводящих каналов, регулирующих водно-электролитный баланс в центральной нервной системе и расположенных в ножках астроцитов, образующих гематоэнцефалический барьер. Они являются серологическим маркером оптикомиелита (болезни Девика).

Aquaporin-4Receptor Antibody;anti-AQP4; NMO(Neuromyelitis Optica) IgG.

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Оптикомиелит (болезнь Девика) – редкое аутоиммунное демиелинизирующее неврологическое заболевание, которое приводит к повреждениям зрительных нервов (неврит) и спинного мозга (миелит). Ранее считалось, что оптикомиелит является формой рассеянного склероза, однако недавно было выяснено, что патогенетические механизмы повреждения нервов и особенности течения при данных заболеваниях отличаются.

Случаи оптикомиелита чаще встречаются у женщин, чем у мужчин. Чаще всего заболевание начинает проявляться к 40 годам, то есть примерно на 10 лет позже, чем типичный рассеянный склероз. Зрительные нервы и спинной мозг повреждаются одновременно или с интервалом в несколько лет. Оптический неврит может быть одно- или чаще двусторонним. Клинически оптикомиелит проявляется нарушением зрения (вплоть до его полной потери), мышечной слабостью, снижением периферической чувствительности, грубым нарушением функции сфинктеров (непроизвольным мочеиспусканием и дефекацией). Поражение спинного мозга распространяется более чем на три сегмента. Заболевание имеет рецидивирующий характер течения без полной ремиссии между обострениями. Оно быстро прогрессирует и приводит к необратимым неврологическим нарушениям. Летальный исход возможен при острой дыхательной недостаточности вследствие нарушения центральной регуляции дыхания.

Диагностика проводится в соответствии с международными критериями (Miller D. H. и соавт, 2008).

"Большие" критерии (требуется наличие всех основных критериев, но они могут присутствовать в разные периоды):

1) неврит зрительного нерва с поражением одного или обоих глаз;

2) поперечный миелит, ассоциированный с наличием подтвержденного по данным МРТ очага поражения спинного мозга, который распространяется по длиннику более чем на 3 позвоночных сегмента;

3) отсутствие данных по саркоидозу, васкулитам, системной красной волчанке, синдрому Шегрена или другого объяснения имеющимся проявлениям.

"Малые" критерии (присутствовать должен по крайней мере один):

1) наиболее свежая МРТ головного мозга должна быть без патологии либо выявлять:

очаги в дорзальных отделах продолговатого мозга, или смежные, или не смежные с очагами в спинном мозге;
очаги в гипоталамусе и/или стволе мозга;
"линейные" очаги, расположенные перивентрикулярно или в мозолистом теле, но не овоидной формы и не распространяющиеся в паренхиму гемисфер головного мозга в форме пальцев Даусона;

2) позитивный тест сыворотки крови или цереброспинальной жидкости на NMO-IgG/антитела к аквапорину 4.

На МРТ очаги поражения соответствуют местам наибольшей локализации аквапорина-4: гипоталамусу, стволу мозга, перивентрикулярным зонам.

Аквапорин 4 – трансмембранный белок водопроводящих каналов клеточных стенок, который регулирует транспорт воды между кровеносными сосудами и астроцитами головного мозга, входящими в структуру гематоэнцефалического барьера.

Впервые антитела к аквапорину 4 были обнаружены в 2004 году как специфические и патогенетически значимые для оптикомиелита иммуноглобулины. Иммунопатологический механизм развития данного заболевания окончательно не выяснен. Предполагается, что повреждение и демиелинизация нервных волокон, вероятнее всего, происходит вторично, как результат нарушения водно-электролитного обмена в местах патологического процесса.

Антитела к аквапорину 4 выявляются у 60-90 % больных оптикомиелитом, что позволяет дифференцировать его с болезнью Девика и рассеянным склерозом, для которых данный вид антител нехарактерен.

Они выявляются также при ряде схожих заболеваний, которые рассматриваются в качестве начальных проявлений оптикомиелита: продольном обширном поперечном миелите и изолированном неврите зрительного нерва. Чувствительность исследования для диагностики оптикомиелита составляет в среднем 75 %, специфичность при распространенных формах – 90 %, а при изолированном рецидивирующем неврите зрительного нерва – 30-50 %.

Уровень антител пропорционален активности заболевания, что позволяет использовать данный анализ для мониторинга течения оптикомиелита и оценки эффективности терапии.

Для чего используется исследование?

Для диагностики оптикомиелита, рецидивирующего поперечного миелита и рецидивирующего неврита зрительного нерва;
для дифференциальной диагностики оптикомиелита и рассеянного склероза;
для мониторинга течения болезни;
для оценки эффективности терапии.

Когда назначается исследование?

При клинических признаках неврита зрительного нерва и повреждения спинного мозга;
при выявлении поперечного миелита по данным магнитно-резонансной томографии;
при дифференциальной диагностике демиелинизирующих заболеваний с невритом и миелитом;
при наблюдении за пациентами с оптикомиелитоподобными расстройствами и болезнью Девика;
во время лечения пациента с оптикомиелитом.

Что означают результаты?

Титр: Причины повышения уровня антител к аквапорину 4:

оптикомиелит (болезнь Девика) в 75 % случаев;
оптикомиелитоподобные расстройства (синдромы с высоким риском перехода в болезнь Девика);
двусторонний неврит зрительных нервов / изолированный рецидивирующий неврит зрительного нерва (14-20 %);
обширный поперечный миелит (38-50 %).

Что может влиять на результат?

На фоне проводимой иммуносупрессивной терапии может быть получен отрицательный результат.

Диагностика должна проводиться с учетом неврологического статуса, данных МРТ и исключения других аутоиммунных и неврологических заболеваний.
Отрицательный результат исследования не исключает диагноза "оптикомиелит" (серонегативный вариант в 25 % случаев).
Диагноз "оптикомиелит" может быть поставлен только при наличии всех трех больших и хотя бы одного малого критериев.

Диагностика рассеянного склероза (изоэлектрофокусирование олигоклонального IgG в ликворе и сыворотке)
Диагностика паранеопластических энцефалитов (антитела к антигенам белого и серого вещества мозга (Yo-1, Hu, Ri) и мембранному антигену (Ma))
Диагностика воспалительных полирадикулоневритов (антитела к ганглиозидам асиало-GM1, GM1, GM2, GD1a, GD1b, GQ1a, GQ1b, GT1a классов IgG/IgM)
Основной белок миелина в ликворе (цереброспинальной жидкости)
Антитела к скелетным мышцам
Диагностика миастении (антитела к ацетилхолиновому рецептору (АхР))
Свободные каппа- и лямбда-цепи иммуноглобулинов в ликворе
Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
Белок общий в ликворе

Кто назначает исследование?

Литература

ШаховБ. Е., БеловаА. Н., Шаленков И. В., Шакурова Д. Н.Оптикомиелит Девика: вопросы диагностики и описание случая из практики. Медицинский Альманах. № 1 (20), 2012. – С. 165-170.
Graber D., Levy M.,Kerr D. and Wade W. Neuromye litis optica pathogenesis and aquaporin 4. JournalofNeuroin flammation 2008, 5:22.
Maruta K, Sonoda Y, Uchida Y, Takahashi T, Fukunaga H. A case of neuromyelitis optica associated with anti-aquaporin 4 antibody and other autoantibodies. Nihon Ronen Igakkai Zasshi. 2012;49(4):491-5.
Sellner J., Boggild M., et al. EFNS guidelines on diagnosis and management of neuromyelitis optica. EuropeanJournalofNeurology 2010, 17: 1019-1032.

Цена:

Авторы работы:

Научный журнал:

Год выхода:

НЕЙРОХИМИЯ, 2014, том 31, № 3, с. 246-253

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНТИТЕЛ К АКВАПОРИНУ-4 ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ЦЕНТРАЛЬНОЙ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ

1ФГБУ "Научный центр неврологии"РАМН, Москва 2НИИэпидемиологии и микробиологии имени Н.Ф. Гамалеи МЗ РФ, Москва

Определение антител к аквапорину-4 при оптикомиелите имеет большое значение для своевременной постановки диагноза с целью начала патогенетической терапии, а также для дифференциальной диагностики при оптикомиелит-ассоциированных расстройствах. В статье рассмотрены основные методы определения антител к аквапорину-4. Приведены собственные данные по выявлению антител к аквапорину-4 при заболеваниях центральной нервной системы с помощью иммунофер-ментного анализа с клеточной презентацией антигена и по оценке данного метода. Данные антитела обнаружены у 83.33% пациентов с оптикомиелитом, у 6.67% пациентов с изолированными синдромами и у 100% пациентов с СКВ с синдромом продольного распространенного миелита. Чувствительность метода при оптикомиелите составила 83%, а при оптикомиелит-ассоциированных расстройствах — 24% (при специфичности 100%).

Ключевые слова: оптикомиелит, болезнь Девика, аквапорин-4, антитела к аквапорину-4, биомаркеры, диагностика, дифференциальная диагностика, оптикомиелит-ассоциированные расстройства, системная красная волчанка, продольный распространенный миелит.

Актуальной современной задачей в различных областях медицины является поиск биомаркеров — измеряемых качественных и количественных показателей, с помощью которых можно оценить, как протекает тот или иной физиологический или патологический процесс с целью диагностики, оценки активности, стадии и контроля терапии. В неврологии ведется поиск биомаркеров при всех основных группах заболеваний: при нарушениях мозгового кровообращения, нейродегенератив-ных заболеваниях: болезни Альцгеймера, болезни Паркинсона, при эпилепсии. В ФГБУ "НЦН" РАМН проводились исследования биомаркеров при атеротромботическом инсульте [1], при синдроме Гийена-Барре [2].

При демиелинизирующих заболеваниях одним из диагностически значимых биомаркеров являются интратекальные олигоклональные антитела 1§0, выявляемые при рассеянном склерозе в 95% случаев [3]. Однако данный показатель является неспецифичным и может быть выявлен при инфекционных заболеваниях ЦНС, а также

*Адресат для корреспонденции: 125367, Москва, Волоколамское ш., д. 80; тел. 8 (495) 490-24-10; e-mail: tarassimaniv@gmail.com.

при системных заболеваниях соединительной ткани. Оптикомиелит (ОМ) — единственное де-миелинизирующее заболевание, при котором идентифицированы специфические маркеры. В 2004 г. в крови пациентов с оптикомиелитом (болезнью Девика) были обнаружены сывороточные аутоантитела, NMO-IgG (neuromyelitisoptica — Immunoglobulin G), которые в совокупности с наличием признаков острого миелита и оптического неврита отличали ОМ от рассеянного склероза и других демиелинизирующих заболеваний [4]. Годом позже было показано, что NMO-IgG селективно связывается с аквапорином-4, одним из основных белков водных каналов ЦНС, локализованным преимущественно в ножках астроцитов, образующих гематоэнцефалический барьер [5]. Обнаружение антител к аквапорину-4 в сыворотке стало рассматриваться как малый диагностический критерий ОМ [6].

Аквапорин-4 (АрР4) — селективный водный транспортер, локализующийся в различных отделах ЦНС, наиболее широко представленный в мембране астроцитарных ножек, в местах их контакта с эндотелием кровеносных сосудов. АрР4

сконцентрирован на поверхностях, контактирующих с цереброспинальной жидкостью (ЦСЖ) субарахноидального пространства и желудочков мозга [7]. ЛрР4 был выделен в 1994 г. из легкого крысы. ЛдР4 чаще всего встречается в ЦНС, но находится также в собирательных канальцах почек, париетальных клетках желудка, скелетных мышцах, эпителии дыхательных путей и эпителии различных желез.

Существуют две основные изоформы ЛрР4, образующиеся в результате альтернативного сплайсинга: относительно длинные М1 изоформы с началом трансляции с Мй-1 и короткие М23 изоформы с началом трансляции с Мй-23 [8]. М1 и М23 изоформы ЛрР4 собираются в мембранах в гетеротетрамеры, которые функционируют как селективный водный канал, проницаемость которого сравнительно высока по сравнению с другими аквапоринами. Селективность для воды обусловлена стерическими и электростатическими свойствами молекулы ЛрР4.

Как и другие аквапорины, ЛрР4 состоит из мономеров, каждый из которых имеет размер около 30 кДа и содержит 6 внутримембранных доменов и два коротких спиральных сегмента, один из которых окружает цитоплазматические ворота водной поры, а другой — внеклеточные [9].

Методом замораживания-скалывания и имму-нозолотого маркирования было установлено, что молекулы ЛрР4 формируют в мембранах клеток ортогональные массивы частиц [10], причем М23 изоформы образуют большие массивы, тогда как М1 рассеяны по мембране в виде тетрамеров [11].

С самого открытия ЛрР4 в 1994 г. известна его роль в регуляции водного баланса ЦНС, в том числе при отеках головного мозга различного ге-неза. ЛрР4 способствует устранению избытка воды в мозге при вазогенном и интерстициальном отеке [12].

При оптикомиелите ЛрР4 становится мишенью иммунной реакции. Очаги поражения возникают преимущественно в тех участках головного мозга, которые демонстрируют высокую иммуно-реактивность к ЛрР4 (гипоталамус, перивентри-кулярные зоны), в них выявляется селективная утрата данного белка. На периферии образуются специфические антитела — ММО-1§О, которые затем проникают через ГЭБ и в ЦНС связываются с ЛрР4. Связывание происходит не с отдельными тетрамерами ЛрР4, а с ортогональными массивами частиц [13]. В результате происходит интернализация рецептора внутрь клетки и активация системы комплемента, повышается продукция воспалительных цитокинов (интерлей-кин-17, интерлейкин-8, гранулоцит-колониести-мулирующий фактор). Под действием цитокинов в очаг поражения инфильтрируются нейтрофилы и эозинофилы. В результате нарушения клеточ-

ных механизмов транспорта воды, повреждения ГЭБ и активной инфильтрации клеточными элементами крови происходят процессы демиелини-зации, сосудистой гиперплазии и гиалинизации стенок капилляров, некроз олигодендроцитов и, в конечном счете, гибель нейронов.

Другими патогенетическими механизмами при оптикомиелите являются активация клеточного иммунитета, что приводит к инфильтрации гранулоцитов и гибели астроцитов с потерей ЛрР4, олигодендроцитов и демиелинизации, гибели нейрональных клеток, и нарушение транспорта и утилизации глутамата, при действии ММО-1§О происходит уменьшение связанного с ЛрР4 транспортера возбуждающих аминокислот ЕЛЛТ2, что нарушает выведение глутамата. Кроме того, в пораженных астроцитах снижается синтез глутаминсинтетазы, превращающей глу-тамат в глутамин, и нарушается утилизация последнего. Таким образом, происходит высвобождение глутамата из астроцитов, его внеклеточное накопление с последующей гибелью олигоденд-роцитов по типу эксайтотоксичности [14].

Выявление антител к аквапорину-4 при оптикомиелите

Антитела к ЛрР4 представляют собой иммуноглобулины класса О. В плазме крови больных оп-тикомиелитом концентрация этих антител в 500 раз выше, чем в ЦСЖ. Это позволяет предположить, что образование ММО-1§О происходит на периферии, а в ЦНС они попадают вторично [15]. Циркулирующих в крови антител недостаточно для формирования повреждений, характерных для ОМ. Это подтверждается тем, что антитела к ЛрР4 обнаруживаются в сыворотке крови пациентов не только во время обострений заболевания, но и в период ремиссии.

ММО-1§О могут выявляться у пациентов задолго до появления симптомов оптикомиелита. Во Франции не выявили связи между количеством обострений, длительностью заболевания, наличием патологических очагов в головном мозге и изменениями в ЦСЖ с выявлением антител в крови [16]. В исследовании, проводившемся на Кубе, установили, что у пациентов, имеющих положительный ММО-1§О статус, обострения более частые и сильнее выражен неврологический дефицит. В европейских исследованиях выявлено, что уровень антител к ЛрР4 коррелирует с активностью заболевания и снижается при лечении ри-туксимабом, азатиоприном, циклофосфамидом [17]. Наиболее высокие титры антител определялись у пациентов с полной потерей зрения и выраженными поражениями головного мозга. Также было выявлено, что титры ММО-1§О коррелировали с длиной очага в спинном мозге в период

ремиссии при минимуме неврологической симптоматики.

В 2006 г. были сформулированы диагностические критерии для оптикомиелита, которые включали в себя абсолютные критерии, такие как оптический неврит и миелит, которые обязательно должны присутствовать у пациента с ОМ, и подтверждающие критерии (минимум два), к которым относились наличие продольных очагов в спинном мозге длиной 3 и более сегмента по данным МРТ спинного мозга, данные МРТ, не удовлетворяющие диагностическим критериям МсDonald для рассеянного склероза, наличие антител к аквапорину-4 в сыворотке крови [18].

Антитела к аквапорину-4 при демиелинизирующих заболеваниях ЦНС

Антитела к AQP4 выявляются не только при классическом оптикомиелите, но и при других расстройствах ЦНС, имеющих картину, не типичную для ОМ: наличие очагов поражения головного мозга, наличие сопутствующих заболеваний нервной системы или системных заболеваний. Было показано, что если у пациентов в крови обнаруживали антитела к AQP4, то у них с высокой вероятностью впоследствии развивался оптико-миелит. Это послужило причиной объединения вышеперечисленных состояний под термином "спектр оптикомиелит-ассоциированных расстройств" [19]. В настоящее время к ним относят:

• Ограниченные формы оптикомиелита: "идиопатический" продольно-распространенный миелит (ПРМ) (очаг в спинном мозге >3 позвоночных сегментов) и билатеральный единичный или повторный оптический неврит (ОН).

• Оптикоспинальный рассеянный склероз.

Для дальнейшего прочтения статьи необходимо приобрести полный текст. Статьи высылаются в формате PDF на указанную при оплате почту. Время доставки составляет менее 10 минут. Стоимость одной статьи — 150 рублей.

АКВАПОРИНЫ И СЛЮННЫЕ ЖЕЛЕЗЫ

ГОЖЕНКО А.И., КОЛИЕВ В.И., СУКМАНСКИЙ И.О., СУКМАНСКИЙ О.И. — 2012 г.

Анализ крови на антитела к аквапорину 4 (NMO), IgG

Иммунологическое исследование крови, которое позволяет определить уровень содержания аутоиммунных антител изотипа G (IgG) к белку водопроводящих каналов аквапорину-4 (NMO), проводится для диагностирования и клинического разграничения нейро-оптикомиелита, оценивания его течения и мониторинга успешности проводимых лечебных мероприятий.

Аквапорин-4 (NMO) представляет собой белок, который образует трансмембранные водные каналы, обеспечивающие перенос жизненно важных веществ через базолатеральную мембрану почечных канальцев в сосуды и оболочки головного мозга. Наибольшее количество аквапорина-4 находится в спинном мозге и гипоталамусе. Иммунная система продуцирует специфические анти-AQP4 – они циркулируют в крови и спинномозговой жидкости, провоцируя:

увеличение проницаемости гематоэнцефалического барьера;
нарушение водно-солевого обмена;
повреждение и демиелинизацию нервных волокон.

Эти явления приводят к развитию оптикомиелита (болезни Девика) – аутоиммунной воспалительной патологии, при которой поражаются зрительные нервы и спинной мозг. Количество антител изотипа G коррелирует с активностью патологического процесса, увеличение их титров наблюдается при рецидиве заболевания.

Анализ крови на анти-AQP4 необходим при:

клинической симптоматике воспаления зрительного нерва и спинного мозга;
обнаружении у пациента признаков поперченного миелита по результатам магнитно-резонансной томографии;
мониторинге состояния пациентов с оптикомиелито-подобными расстройствами – синдромами, при которых существует высокий риск развития оптикомиелита;
контроле лечения болезни Девика.

Исследование рекомендуется проводить до начала иммуносупрессивной терапии. Биологический материал – кровь из вены, для теста используют сыворотку. Венепункция осуществляется в утренние часы (с 8.00 до 11.00), натощак.

Накануне анализа пациент должен ограничить курение и отказаться от:

употребления жирной пищи и алкогольных напитков;
применения обезболивающих и нестероидных противовоспалительных средств;
физического и психоэмоционального перенапряжения.

В норме титр ауто-антител к аквапорину не превышает соотношения 1:10. Этот результат – отрицательный.

Увеличение показателей встречается при:

оптикомиелите (приблизительно в 80% случаях);
двустороннем неврите зрительных нервов;
обширном воспалении тканей спинного мозга;
изолированном рецидивирующем неврите зрительного нерва;
оптикомиелито-подобных расстройствах.

Рационально подобранная тактика иммуносупрессивной терапии способствует уменьшению количества аутоиммунных антител.

При интерпретации результатов исследования учитывают неврологический статус пациента, данные МРТ и дополнительных лабораторных исследований.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Иванова М.В., Захарова М.Н.

Одним из ключевых событий в патогенезе рассеянного склероза (РС) является развитие иммунопатологических реакций в центральной нервной системе (ЦНС). Важную роль играют реакции гуморального иммунитета с образованием антител к компонентам миелиновой оболочки, однако не до конца ясными остаются мишени антител, их вклад в развитие патологического процесса и этапы заболевания, на которых они имеют наибольшее значение. В настоящей работе проведено изучение частоты выявления антител к гликолипидам миелина при РС и их взаимосвязи с клиническими особенностями болезни. Результаты исследования показали, что у пациентов с РС имеется тенденция к более частому выявлению антител к гликолипидам и антител к сульфатиду в сыворотке крови, особенно выраженная в группе пациентов с вторичнопрогредиентным течением. У пациентов с вторичнопрогредиентным РС значительно чаще выявлялись антитела к ганглиозиду GM1 по сравнению с пациентами с ремиттирующим течением и здоровыми добровольцами. Полученные результаты указывают на то, что антитела к липидам могут участвовать в развитии демиелинизирующего и нейродегенеративного процессов при РС и быть маркерами прогрессирования заболевания. Дальнейшее развитие представлений о механизмах развития гуморального ответа к липидам миелина при РС и идентификация наиболее значимых мишеней антител будет способствовать разработке новых подходов к прогнозированию течения заболевания и выявлению новых мишеней для иммуномодулирующей терапии.

Antibodies to myelin lipids in multiple sclerosis

Development of immunopathological reactions in the central nervous system (CNS) is one of the key events in the pathogenesis of multiple sclerosis (MS). Humoral immune responses with formation of antibodies to the components of the myelin sheath play an important role. However, the targets for antibodies, their contribution to the development of pathologic process, and stages of the disease, where they play the most important role, are still not quite clear. In this study, we investigated the frequency of detection of antibodies to myelin glycolipids in MS and their relationship with clinical features of the disease. The results of the study showed that patients with MS demonstrate a trend towards more frequent detection of antibodies to glycolipids and sulfatide in blood serum, which is especially pronounced in patients with secondary progressive course. Antibodies to GM1 ganglioside were significantly more frequently detected in patients with secondary progressive MS as compared to patients with remitting course and healthy volunteers. These results are indicative of the fact that antibodies to lipids may participate in the development of demyelinating and neurodegenerative processes in MS and be the markers of disease progression. Further development of the concept of the mechanisms of humoral response to myelin lipids in MS and identification of the most significant antibody targets will facilitate the development of new approaches to prediction of disease course and discovery of new targets for immunomodulating therapy.

Антитела к липидам миелина при рассеянном склерозе

М.В. Иванова, М.Н. Захарова

Одним из ключевых событий в патогенезе рассеянного склероза (РС) является развитие иммунопатологических реакций в центральной нервной системе (ЦНС). Важную роль играют реакции гуморального иммунитета с образованием антител к компонентам миелиновой оболочки, однако не до конца ясными остаются мишени антител, их вклад в развитие патологического процесса и этапы заболевания, на которых они имеют наибольшее значение. В настоящей работе проведено изучение частоты выявления антител к гликолипидам миелина при РС и их взаимосвязи с клиническими особенностями болезни. Результаты исследования показали, что у пациентов с РС имеется тенденция к более частому выявлению антител к гликолипидам и антител к сульфатиду в сыворотке крови, особенно выраженная в группе пациентов с вторично-прогредиентным течением. У пациентов с вторично-прогредиентным РС значительно чаще выявлялись антитела к ганглиозиду GM1 по сравнению с пациентами с ремиттирующим течением и здоровыми добровольцами. Полученные результаты указывают на то, что антитела к липидам могут участвовать в развитии демиелинизирующего и нейродегенеративного процессов при РС и быть маркерами прогрессирования заболевания. Дальнейшее развитие представлений о механизмах развития гуморального ответа к липидам миелина при РС и идентификация наиболее значимых мишеней антител будет способствовать разработке новых подходов к прогнозированию течения заболевания и выявлению новых мишеней для иммуномодулирующей терапии.

Ключевые слова: рассеянный склероз, липиды миелина, гуморальный иммунитет, аутоантитела,

демиелинизирующие заболевания ЦНС.

Рассеянный склероз (РС) - хроническое иммуно-опосредованное заболевание центральной нервной системы (ЦНС), для которого характерны процессы воспаления, демиелинизации, аксо-нальной дегенерации и астроглиоза в головном и спинном мозге. Молекулярные механизмы воспаления и нейродегенерации, лежащие в основе РС, во многом не изучены, однако считается, что важное значение имеют иммунопатологические реакции с участием аутоантигенов.

Мишени антител, зарегистрированных в биологических жидкостях у пациентов с РС, до конца не известны. При электрофорезе цереброспинальной жидкости (ЦСЖ) у пациентов определяются так называемые олигоклональные полосы, отражающие интенсивный интратекальный синтез антител несколькими клонами В-лимфоцитов. Выявление интратекального синтеза иммуноглобулинов является характерным для РС маркером и встречается в 70-97% случаев [14]. Наличие олигоклональных полос свидетельствует в пользу наличия полиспецифического гуморального иммунного ответа у пациентов с РС. Следует отметить, что набор олигоклональных полос у разных пациентов отличается, в то же время у одного и того же больного он остается неизменным [21].

В течение многих лет ученые пытаются определить мишени антител, секретируемых при РС, и установить корреляции иммунопатологических изменений с особенностями заболевания. Долгое время основными кандидатами на роль мишеней были белки миелина, такие как основной белок миелина (ОБМ), миелин-олигодендроцитарный белок (МОГ), миелин-ассоциированный гликопротеин (МАГ), протеолипидный белок (ПЛП). Рядом исследователей была показана связь заболевания с выявлением антител к различным инфекционным возбудителям, в первую очередь вирусу Эпштейна-Барр (ВЭБ) [8]. Изучались также антитела к небелковым компонентам нервной ткани, таким как липиды и гликаны.

Антитела к различным липидам являются хорошо известными диагностическими и/или прогностическими маркерами таких форм патологии, как антифосфолипидный синдром [1], синдром Гийена-Барре [2] и др. При РС к настоящему времени наблюдается увеличение доли пациентов, у которых выявляются антитела к липидам в ЦСЖ [6] и сыворотке/плазме крови [13, 16]. Было показано, что выявление ли-пид-специфичных олигоклональных ^М в ЦСЖ пациентов с РС связано с более тяжелым течением заболевания и более быстрым прогрессированием аксональной дегенерации [18]. В то же время конкретные мишени антител к липидам и взаимосвязь выявления определенных антител с клиническими особенностями заболевания требуют уточнения.

Целью нашей работы было проанализировать частоту выявления антител различных классов (^М, IgG) к липидам в сыворотке крови и ЦСЖ у пациентов с РС, а также выявить взаимосвязь наличия антител с клиническими характеристиками заболевания.

Пациенты и методы

В исследование были включены 111 пациентов с РС, проходивших стационарное лечение в Научном центре неврологии, и 49 здоровых добровольцев. Диагноз РС был выставлен в соответствии с критериями МакДональда (2010). Возраст пациентов с РС составил 35 [27; 43] лет, в группе было 42 мужчины (37,8%) и 67 женщин (62,2%). Среди пациентов с РС были выделены 2 группы: пациенты с ремиттирующим РС (РРС, n=76) и вторично-прогредиентным РС (ВПРС, n=35). Возраст пациентов с РРС составил 30,5 [26; 38] лет, пациентов с ВПРС - 41 [36; 45] лет. Среди пациентов с РРС было 32 мужчины (42,1%) и 44 женщины (57,9%), среди пациентов с ВПРС - 10 мужчин (28,6%) и 25 женщин (71,4%). Группа здоровых статистически соответствовала по полу и возрасту общей группе пациентов с РС: возраст участников-добровольцев составил 34 [28; 46] года, в группе было 14 мужчин (28,6%) и 35 женщин (71,4%).

Пациентам проводились неврологический осмотр, сбор анамнеза, при необходимости - люмбальная пункция и МРТ головного и спинного мозга. Оценивались такие клинические характеристики, как наличие активности заболевания, частота обострений, число обострений, длительность заболевания, длительность первой ремиссии, выраженность неврологического дефицита по расширенной шкале инвалидности (EDSS) и выраженность дефицита по отдельным функциональным шкалам, симптоматика, с которой заболевание дебютировало, длительность заболевания до наступления прогредиентного течения и принимавшиеся ранее препараты (в группе ВПРС).

У всех пациентов и здоровых добровольцев производился забор крови из кубитальной вены. У 35 пациентов с РС дополнительно анализировалась ЦСЖ, полученная в рамках планового обследования. В сыворотке крови и ЦСЖ проводилось определение антител классов IgM и IgG к следующим липидам миелина: сульфати-дам, GM1, GM2, GM3, GM4, GD1a, GD1b, GD2, GD3, GT1a, GT1b, GQ1b. Определение антител проводилось методом дот-блот с использованием коммерческой тест-системы для качественного определения антител к гли-колипидам в сыворотке крови и ЦСЖ Anti-Ganglioside Dot (Generic Assays, Германия) [7]. В качестве антигенов в рамках данного исследования были выбраны глико-липиды: наличие в их структуре сложного, часто разветвленного, гидрофильного углеводного остатка может лежать в основе их антигенного потенциала, но при этом частота выявления антител к гликолипидам при РС остается неясной. Интерпретация результатов проводилась по наличию и степени выраженности изменения окраски тест-полоски в сравнении с положительным и отрицательным контролем (сыворотка крови с наличием антител к определенным липидам или отсутствием антител к липидам).

Статистическая обработка результатов проводилась с помощью программы Statistica 8.0 (StatSoft, США). Данные представлены в виде медиан, нижнего и верхнего квартилей (Me [Q1; Q3]), минимальных и максимальных значений (для клинических характеристик пациентов), абсолютных величин и долей от общего числа участников группы (для данных по наличию антител к липидам в биологических жидкостях участников исследования). Определение различий между группами по серопозитивности к тому или иному липиду проводилось с помощью критерия хи-квадрат и точного критерия Фишера. Вычисление корреляций между серопозитивностью пациентов и количественными клиническими характеристиками проводилось с помощью коэффициента Спирмена.

У пациентов группы РРС частота обострений составляла от 0 до 3 в год (1 [0; 2]), число обострений — от 1 до 12 (2 [1,8; 3]), длительность первой ремиссии - от 1 до 240 мес (17,5 [5; 46]), длительность заболевания — от 0,5 до 414 мес (26 [5,8; 73,5]), балл по шкале EDSS - от 1,5 до 4,5 (2,3 [2; 3]). Шестьдесят один пациент был обследован в фазе обострения, 17 - в фазе ремиссии. У 16 пациентов заболевание дебютировало с ретробульбарного неврита, у 13 -с нарушения функции черепных нервов, у 11 - с пирамидных нарушений, у 10 - с мозжечковой атаксии, у 12 - с расстройств чувствительности, у 2 - с нарушения психических функций и у 12 больных отмечался полисимптомный дебют.

В группе ВПРС у 10 пациентов было течение без обострений, у 23 заболевание протекало с обострениями. Частота обострений в этой подгруппе составляла от 0 до 3 в год. Число обострений в группе ВПРС составило от 1 до 30 (6 [4,3; 15]), длительность первой ремиссии - от 1 до 130 мес (24 [12; 48]), длительность заболевания - от 27 до 400 мес (175,5 [99; 223,5]), длительность заболевания до наступления прогредиентного течения - от 19 до 372 мес (84 [61,5; 132]), балл по шкале EDSS - от 4,5 до 8,5 (6,5 [5,5; 7]), 16 пациентов были обследованы в фазе обострения. У 5 пациентов заболевание дебютировало с ретробульбарного неврита, у 3 - с нарушения функции черепных нервов, у 10 - с пирамидных нарушений, у 4 - с мозжечковой атаксии, у 6 - с расстройств чувствительности, у 2 - с нарушения психических функций, у 5 больных отмечался по-лисимптомный дебют.

При анализе сыворотки крови и ЦСЖ антитела к липидам были выявлены у 47/111 (42,3%) пациентов с РС, в т.ч. у 29/76 (38,1%) пациентов с РРС и у 18/35 (51,4%) пациентов с ВПРС, а также у 21/49 (42,8%) здоровых добровольцев. При этом антитела класса IgM были выявлены у 34/111 (30,6%) пациентов с РС (РРС - 21/76, 27,6% и ВПРС - 13/35, 37,1%) и у 15/49 (30,6%) здоровых добровольцев, антитела класса IgG - у 29/111 (26,1%) пациентов с РС (РРС - 18/76, 23,7% и ВПРС - 11/35, 31,4%) и у 11/49 (22,4%) здоровых добровольцев. Статистически значимых различий между группами не выявлено. В ЦСЖ антитела к липидам были выявлены лишь в редких случаях (табл. 1). Зависимости между обнаружением антител к липидам в сыворотке и ЦСЖ выявлено не было.

Среди антител к липидам наиболее часто при ВПРС встречались антитела к сульфатидам и GM1, а при РРС -антитела к GM4. Нами была проанализирована связь выявляемых антител с наличием и формой заболевания, а также с клиническими и демографическими характеристиками.

Антитела к сульфатиду были выявлены в сыворотке у 37/111 (33,3%) пациентов с РС (РРС - 23/76, 30,3% и ВПРС - 14/35, 40%) и у 13/49 (26,5%) здоровых добровольцев. Антитела класса IgM были выявлены у 25/111 (22,5%) пациентов с РС (РРС - 16/76, 21% и ВПРС - 9/35, 25,7%) и у 7/49 (14,3%) здоровых добровольцев, антитела класса IgG - у 26/111 (23,4%) пациентов с РС (РРС -16/76, 21% и ВПРС - 10/35, 28,6%) и у 9/49 (18,4%) здоровых добровольцев. Статистически значимых различий между частотой выявления антител к сульфатиду классов IgM, IgG и общей частотой выявления антител к сульфатиду выявлено не было.

ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ. Клиническая неврология Антитела к липидам миелина при рассеянном склерозе

таблица 1: Антитела к липидам в крови и ЦСЖ пациентов с РС и здоровых добровольцев (число случаев выявления).

Липид Антитела в сыворотке Антитела в ЦСЖ

Пациенты (n=111) Здоровые добровольцы (n=49) Пациенты (n=35)

Читайте также: