Иммунорегуляторный индекс при рассеянном склерозе

Исследование включает в себя определение абсолютных и относительных значений субпопуляционного состава Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CD8, CD45) и соотношения Т-хелперы / Т-цитотоксические клетки. Рекомендуется к назначению для контроля показателей клеточного звена иммунной системы в динамике после комплексного иммунологического обследования.

Иммунофенотипирование, клеточный иммунитет, многоцветный клеточный анализ методом проточной цитометрии, Т-клетки, Т-хелперы, Т-цитотоксические клетки.

Human Immune System, Immunophenotyping, Multicolor Flow Cytometry Cell Analysis, Human Leukocyte Differentiation Antigens, Human T cells, T helper cells, Cytotoxic T cells.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
Не принимать пищу в течение 12 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 24 часов до исследования.
Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Оценка клеточного состава (иммунофенотипирование) лимфоцитов крови человека - основной компонент в оценке иммунного статуса выполняется методом проточной цитофлуориметрии.

Иммунофенотипирование - характеристика клеток при помощи моноклональных антител или каких-либо других зондов, позволяющих судить об их типе и функциональном состоянии по наличию того или иного набора клеточных маркеров.

Иммунофенотипирование лейкоцитов заключается в обнаружении на их поверхности маркеров дифференциации, или CD антигенов. Лейкоциты экспрессируют ряд поверхностных и цитоплазматических антигенов, уникальных для своей субпопуляции и стадии развития. CD антигены (англ. cluster of differentiation antigens) - это антигены на поверхности клеток, маркеры, отличающие одни типы клеток от других. Дифференциации этих антигенов изучены и стандартизованы, им присвоены определенные номера. CD могут быть распознаны с помощью соответствующих моноклональных антител. Используя флюоресцентно-меченые моноклональные антитела, связывающиеся с определенными CD, можно с помощью метода проточной цитометрии произвести подсчёт содержания лимфоцитов, относящихся к различным по функции или стадии развития субпопуляциям.

В основе проточной цитофлуориметрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости луч монохроматического света, обычно света лазера.

Этот маркер позволяет идентифицировать зрелые покоящиеся (интактные) Т-клетки и подсчитать общее количество Т-лимфоцитов. Количественная оценка субпопуляции CD3+ лимфоцитов имеет диагностическую значимость в следующих случаях:

- первичные и вторичные иммунодефициты;

- острые вирусные инфекции, включая ВИЧ;

- внутриклеточные бактериальные и паразитарные инфекционные заболевания (например, туберкулез, лепра, лейшманиоз);

- реакции отторжения трансплантатов и болезни "трансплантат против хозяина";

- лимфопролиферативные расстройства (острый Т-лимфобластный лейкоз).

При сахарном диабете довольно часто наблюдается снижение у больных процентного содержания и абсолютного числа СD3+ лимфоцитов.

Использование МКА к CD4 антигену дает возможность количественно охарактеризовать особый клон клеток, получивших название Т-хелперов/индукторов. СD4+ клетки в функциональном отношении делятся на два вида хелперных лимфоцитов: Т-хелперы 1-го порядка (Th1-клетки) и 2-го порядка (Th2-клетки). Различные CD4+ Т-клетки продуцируют разные наборы цитокинов. Th1-клетки (их еще называют клетками гиперчувствительности замедленного типа – ГЗТ) – цитокины для клеточного иммунного ответа – интерлейкин 2 (IL-2), IL-3, g-IFN, TNF-a, TNF-b, – среди которых дискриминантным цитокином является g-IFN. Th2 секретируют набор цитокинов, необходимый для гуморального иммунного ответа: IL-3, 4, 5, 6, 10, 13, TNF-b, среди которых дискриминантным цитокином является IL-4.

Определение количества CD4+ клеток имеет значение при диагностике состояний, связанных с дефектами антителопродукции и реакций клеточноопосредованного иммунитета. Показателю числа CD4+ клеток отводится решающая роль для прогноза течения ВИЧ-инфекции.

Функциональное состояние CD4+ лимфоцитов тестируют по цитокиновому профилю: функциональная полноценность Th1-клеток подтверждается по секреции g-IFN, а Th2-клеток – по секреции IL-4.

Дифференцировочная молекула CD8 представляет собой гликопротеин, обнаруживаемый на поверхности тимоцитов и Т-лимфоцитов и участвующий в распознавании антигенных пептидов в контексте с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I.

Клиническая значимость определения количества СD8+ лимфоцитов:

вирусные инфекции (при определенной модификации имеется возможность количественной оценки вирусоспецифических цитолитических CD8+ Т-лимфоцитов);
при ряде заболеваний большое прогностическое значение имеет соотношение между CD4- и CD8-субпопуляциями Т-лимфоцитов (иммунорегуляторный индекс CD4/CD8); например, прогрессирующее снижение иммунорегуляторного индекса у ВИЧ-инфицированных больных может свидетельствовать о переходе в СПИД;
злокачественные новообразования;
оценка эффективности проведенной вакцинации (в особенности противовирусными вакцинами).

До недавнего времени приписываемая субпопуляции CD8+ клеток супрессорная активность сейчас практически полностью отвергается. По данным большинства экспериментальных и клинических исследований, считается, что существование какой-либо отдельной популяции Т-супрессорных клеток даже без привязки к CD8-маркеру маловероятно.

При аутоиммунных тиреоидитах, в частности при диффузном токсическом зобе (ДТЗ), в реакциях клеточного иммунитета отмечается снижение субпопуляции CD8+ лимфоцитов и снижение функциональной активности цитотоксических лимфоцитов.

При сахарном диабете также отмечается снижение функциональной активности и количества CD8+ лимфоцитов.

Снижение фракции СD8+ лимфоцитов наблюдается также у больных с первичной хронической недостаточностью коры надпочечников (болезнь Аддисона).

Метод позволяет определить количественное соотношение основных популяций Т-лимфоцитов:

Т-лимфоциты (CD3 + CD19 - );
Т-хелперы/индукторы ( CD3 + CD4 + CD45 + );
Т-цитотоксические лимфоциты (Т-ЦТЛ) ( CD3 + CD8 + CD45 + );
соотношение Т-хелперы / Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD4 + / CD3 + CD8 + ).

Когда назначается исследование?

Рекомендовано для комплексного обследования пациентов, входящих в группу риска по четырем основным иммунопатологическим синдрома.

С инфекционным синдромом:

частые ОРВИ, хронические инфекции ЛОР-органов (гнойные синуситы, отиты, периодически встречающиеся лимфадениты, пневмонии с тенденцией к рецидивированию, бронхоплевропневмонии);
бактериальные инфекции кожи и подкожной клетчатки (пиодермии, фурункулез, абсцессы, флегмоны, септические гранулемы, рецидивирующий парапроктит у взрослых);
урогенитальные инфекции;
грибковые поражения кожи и слизистых оболочек, кандидоз, паразитарные инвазии;
рецидивирующий герпес различной локализации;
гастроэнтеропатия с хронической диареей неясной этиологии, дисбактериозом;
длительный субфебрилитет, лихорадка неясной этиологии;
генерализованные инфекции: сепсис, гнойные менингиты.

С аллергическим (атопическим) синдромом:

атопический дерматит;
нейродермит;
экзема с инфекционным компонентом;
тяжелая атопическая бронхиальная астма, поллиноз, хронический астматический бронхит.

С аутоиммунным синдромом:

ревматоидный артрит;
рассеянный склероз;
диффузные заболевания соединительной ткани (системная красная волчанка, склеродермия, дерматомиозит);
аутоиммунный тиреоидит;
неспецифический язвенный колит;

С иммунопролиферативным синдромом:

опухолевые процессы в иммунной системе (лимфомы, болезнь Ходжкина, острый и хронический лимфолейкоз, саркома Капоши).

Что означают результаты?

Изменения различных клеточных популяций лимфоцитов в сторону повышения или понижения развиваются при различных патологических процессах в организме, таких как инфекции, аутоиммунные и онкологические заболевания, иммунодефициты, в постоперационном периоде, при трансплантации органов.

Ниже представлена таблица с клиническими ситуациями, которые могут приводить к изменениям в субпопуляционном составе лимфоцитов.

Субпопуляция лимфоцитов

Повышение показателя

Снижение показателя

• Острые и хронические инфекции;

• длительный прием лекарственных препаратов (особенно монотерапия);

• прием биологически активных добавок;

• интенсивные занятия спортом;

• Некоторые виды инфекций;

• алкогольный цирроз печени;

• прием иммуносупрессивных препаратов.

• Ряд аутоиммунных заболеваний;

• отдельные Т-клеточные лейкозы;

• отравление солями бериллия.

• Иммунодефицитные состояния (основной лабораторный признак вторичного иммунодефицита);

• алкогольная болезнь печени;

• прием иммуносупрессивных препаратов или стероидов.

Т-цитотоксические лимфоциты (CD3 + CD8 + CD45 + )

• Некоторые вирусные инфекции;

• ряд Т-клеточных лейкозов;

• острая фаза аллергии;

• ряд аутоиммунных патологий.

• Некоторые виды аутоиммунных, аллергических заболеваний;

В совокупности с клиническими данными, симптоматикой, другими методами лабораторных исследований вышеуказанные изменения являются диагностическим признаком возникновения этих патологических процессов в организме человека.

Результаты данного исследования необходимо сопоставлять с клиническими данными и показателями других лабораторных анализов.
Оценка показателей в динамике существенно повышает клиническую значимость исследования.

Данные о субпопуляциях лимфоцитов в крови и ликворе больных РС достаточно противоречивы.

Нарушение иммунорегуляции при РС проявляется также при исследовании неспецифической супрессорной активности. Получены данные о снижении супрессорной активности клеток, стимулированных Кон-А при обострении РС с возвращением до контрольных показателей при выходе из обострения (Balashov K.E., Weiner H.L., 1994; Balashov K.E. et al., 1995).

Недостаточность супрессорных систем проявляется и в снижении способности Т-клеток больных РС контролировать продукцию Ig всех классов В-клетками in vitro, особенно при активном РС (Oger J. et al., 1986). Повышение продукции иммуноглобулинов клеточными структурами больных РС можно расценивать как проявление активации В-клеток in vivo; последствиями такой активации могут быть олигоклональные Ig и наличие свободных легких цепей Ig в ликворе больных (Тотолян Н.А. и др., 1991; Тотолян Н.А., 1993). Выявление олигоклональных групп IgG в ликворе не является специфичным для РС тестом. Эти IgG могут быть выявлены у больных с различными воспалительными заболеваниями мозга, неврологическими проявлениями СПИДа и другими заболеваниями. В то же время, около 5% больных с клинически достоверным РС могут не иметь олигоклональные группы IgG в ликворе (Zemen A. et al, 1996), а специфичность олигоклональных Ig может меняться по мере развития заболевания. Повышенное содержание легких цепей Ig каппа-типа имеют от 80 до 95% больных РС. В диагностически сложных ситуациях при нарушенной проницаемости гемато-энцефалического барьера более информативен расчет индекса легких цепей. Этот тест позволяет подтвердить диагноз РС в 95% случаев, а на стадии ранних клинических проявлений (1-3 месяца) -–в 85% случаев (Sindick C., Laterre E.,1991; Тотолян Н.А., 1998).

В лаборатории нейроиммунологии Института мозга человека РАН проводится подробное изучение иммунологического статуса у пациентов с ремиттирующей формой рассеянного склероза в разные периоды течения заболевания (И.Д.Столяров и др., 1998). Мы придерживаемся следующего определения периодов заболевания (Е.И.Гусев и др., 1997):

? обострение – появление нового симптома или группы симптомов или отчетливое ухудшение уже имевшихся симптомов после того, как неврологическое состояние больного было стабильным или улучшалось на протяжении не менее месяца;

? ремиссия – отчетливое улучшение состояния больного в виде уменьшения выраженности или исчезновения симптома и/или симптомов, которое должно длиться не менее 24 часов (при длительности ремиссии более 1 месяца она может определяться как стойкая);

? стабилизация – отсутствие обострений, ремиссий или хронического прогрессирования на протяжении по крайней мере 1 месяца.

В период обострения заболевания обнаруживается незначительное снижение зрелых Т-лимфоцитов (CD3+), преимущественно за счет субпопуляции супрессорных/цитотоксических клеток (CD8+) (таблица 11), а также повышение пролиферативной и функциональной активности клеток в ответ на митогены.

В период ремиссии при нормализации количества CD3+ лимфоцитов значительно повышается уровень CD8+ субпопуляции лимфоцитов по сравнению с показателями в контрольной группе. Следствием дисбаланса регуляторных субпопуляций является снижение иммунорегуляторного индекса (отношение CD4+ к CD8+), свидетельствующее о нарушении дифференцировки иммуноцитов. При исследовании функциональных показателей обнаружено угнетение ответа лимфоцитов на митоген лаконоса (PW) на 42% и снижение спонтанного включения 3Н+-тимидина на 57% в сравнении с соответствующими показателями у доноров. Угнетение пролиферативного ответа сопровождалось повышением супрессорной активности лимфоцитов: спонтанная супрессорная активность составила 312% от нормы, Кон-А-индуцированная – 243% от нормы. Фагоцитарная активность нейтрофилов в НСТ-тесте имела следующие особенности: наблюдалось снижение резервного коэффициента на 40% по сравнению с донорами, в основном за счет повышения уровня базального НСТ, который составил 321% от нормы. Обнаружена дисиммуноглобулинемия: содержание IgA было снижено до 43%, IgM повышено до 172% от нормы. Отмечено снижение цитотоксической активности ЕК.

Субпопуляция CD22+ лимфоцитов, отражающая состояние гуморального иммунитета, претерпевала незначительные изменения, не выходя за границы нормальных значений во все периоды заболевания.

Реконституция иммунной системы завершается в период стабилизации заболевания, когда все показатели приобретают нормальные значения, достоверно не отличающиеся от значений в контрольных группах. Это касается и уровня сенсибилизации лимфоцитов к мозгоспецифическим антигенам (основному белку миелина – ОБМ, антигену нейрональных мембран, галактоцереброзидам-С 1 типа, белку S-100) в реакции торможения адгезии лейкоцитов (РТАЛ) (см. таблицу 2). В периоды обострения и ремиссии сохраняется гиперчувствительность лимфоидных клеток к этим антигенам, особенно выраженная к ОБМ, а в период стабилизации происходит нормализация данных показателей.

Уровень субпопуляций Т- и В-лимфоцитов у больных РС в разные периоды заболевания

Примечание: * - достоверное различие при сравнении результатов пациентов с РС и доноров при р ? 0,01.

Сенсибилизация лимфоцитов к нейроспецифическим антигенам у больных РС в разные периоды заболевания

Примечания: 1) Индекс адгезии выражается в условных единицах.

2) *- достоверное различие при сравнении результатов пациентов с РС и доноров при р ? 0,01.

Предполагается, что характер сенсибилизации зависит от наличия и распространенности демиелинизирующего процесса. Выраженная сенсибилизация к белку S-100, вероятно, связана с повреждением как нейронов, так и клеток глии, и свидетельствует о развертывании реакции гиперчувствительности к специфическим мозговым антигенам. Аутоиммунная реакция сопровождается разрушением оболочек аксона и глиальных клеток, продуцирующих миелин, что подтверждается выявлением гиперчувствительности лимфоцитов к основному белку миелина. Обнаружение гиперчувствительности к антигену нейрональных мембран фиксирует повреждение мембран нейронов, что не может быть выявлено и описано при МРТ, но сопровождается выраженными клиническими паттернами.

Сенсибилизация к галактоцереброзидному антигену регистрировалась в 60% случаев, что может свидетельствовать о высокой степени вовлечения в патологический процесс наружных мембран миелина и олигодендроцитов, на которых локализуются галактоцереброзиды. Подтверждением этому может служить обнаружение в сыворотке крови у большинства больных РС аутоантител к галактоцереброзидам.

Интерфероновый статус также претерпевает значительные изменения в различные периоды заболевания. Исследование показателей интерферонового статуса позволяет судить об иммунореактивности организма in situ. Например, повышение титров сывороточного ИФН может свидетельствовать об острой стадии заболевания, а нормализация показателей ИФН-статуса обычно совпадает с процессами выздоровления. Также обнаружена прямая связь между показателями ИФН-гамма и тяжестью заболевания и обратная связь с количеством ИФН-альфа.

В период обострения нами было обнаружено значительное повышение сывороточного интерферона, снижение альфа-интерферона и повышение (в сравнении с показателями в другие периоды заболевания) гамма-интерферона. В дальнейшем, при относительной ригидности напряженности уровня сывороточного интерферона определялось значительное уменьшение степени индукции гамма-интерферона (таблица 13).

Показатели интерферонового статуса у больных РС в разные периоды заболевания

Примечание: * - достоверное различие при сравнении результатов пациентов с РС и доноров при р ? 0,01.

Проанализировав результаты нейроиммунологического тестирования, мы выделили несколько основных показателей иммунного статуса, на которые рекомендуем ориентироваться при назначении пациентам иммунокорригирующих препаратов:

• содержание супрессорных/цитотоксических лимфоцитов,

• значение соотношения CD4 +/ CD8 +,

• уровень чувствительности иммуноцитов к основному белку миелина,

• уровень продукции интерферона-гамма.

Подчеркнем, что изменение показателей клеточного и гуморального иммунитета указывает на необходимость иммунологического мониторинга и иммунотерапии и в стадии ремиссии и стабилизации заболевания.

В последнее время в литературе обсуждается значение нарушения соотношения Т-хелперов первого (Тх1) и второго типов (Тх2), и нарушения баланса про- и противовоспалительных цитокинов в патогенезе рассеянного склероза. Большое внимание уделяется повышению активности Тх1-лимфоцитов и моноцитов и продукции иммунокомпетентными клетками провоспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-12, ФНО-альфа и ИФН-гамма. Nicoletti F., Patti F., Coeuzza C. et al. (1996) считают важным в патогенезе РС повышение активности Тх1-лимфоцитов и выработки ими таких провоспалительных цитокинов, как ИЛ-2, ФНО-альфа, ИФН-гамма, ИЛ-12. По мнению этих же авторов, ИЛ-12-индуцированный Тх1-обусловленный иммунный ответ вызывает демиелинизацию и повреждение олигодендроцитов.

В патогенезе РС важное место занимает нарушение цитокиновой регуляции как интратекальных, так и периферических механизмов иммунного ответа. В частности, в образцах мозга больных РС обнаружены отсутствующие в норме или при других неврологических заболеваниях невоспалительного характера клеточно-ассоциированные формы ФНО-альфа и ИЛ-1 (Hofman F.M., Hanwehr R.I., Dinarello C.A. et al.,1986; Hofman F.M., Hinton D.R., Johnson K., Merrill J.E.,1989).

Продукция ИЛ-1 была зарегистрирована в большинстве очагов и в гистологически неизмененной паренхиме мозга больных РС, но наиболее активная продукция этого цитокина отмечена именно в активных очагах (Canella B., Raine C.S., 1995). Гистохимические исследования показали, что в мозге больных РС ИЛ-1 появляется преимущественно на макрофагах в центре очагов и на микроглии (Brosnan C.F. et al., 1995).

При РС не выявляется отчетливого повышения содержания ИЛ-1 в сыворотке и ликворе, но наблюдается повышение спонтанной и митогенстимулированной продукции ИЛ-1 клетками крови и ликвора, чаще при активном течении заболевания (Imamura K. et al., 1993; Maimone D. et al., 1993; Matsuda M. et al., 1991; Оганезов В.К. и др.,1992).

В большинстве исследований отмечено повышение содержание ИЛ-6 в ликворе больных РС (Araga S. et al., 1991; Maimore D. et al., 1991; 1993). Культуры клеток крови больных РС вырабатывают повышенное количество этого цитокина (Imamura K. et al., 1993; Maimone D. et al., 1993; Navikas V. et al., 1996). Продукция этого цитокина клетками больных РС еще больше повышалась после стимуляции клеток антигенами мозга, что не наблюдалось при использовании клеток от больных с другими неврологическими заболеваниями (Navikas V. Et al., 1996). Механизмы участия ИЛ-6 в патогенезе РС могут быть связаны с характерной для этого заболевания признаками поликлональной активации В-системы иммунитета. ИЛ-6 влияет на дифференцировку нейронов, усиливает продукцию фактора роста нервов и ремиелинизацию (Satoh T. et al., 1988).

При активном РС происходит повышение продукции ИЛ-6 и ИЛ-1 (Оганезов В.К., 1992), что является признаком активации моноцитов и может приводить к повышению продукции патогенных антител. В то же время, активация гуморального иммунитета под влиянием ИЛ-6 может сопровождаться подавлением активности клеточных реакций, что при РС является благоприятным эффектом. Так как ИЛ-6 может снижать продукцию ИЛ-1 и ФНО-альфа (Schindler et al., 1990), повышать продукцию ингибиторов ИЛ-1 (Tilg H. Et al., 1994) и стимулировать регенерацию (Satoh T. еt al., 1988), то повышение его продукции может иметь противовоспалительный и компенсаторный характер.

Как уже отмечалось, ФНО-альфа является цитотоксичным для олигодендроцитов и может оказывать непосредственное повреждающее действие на миелин (Warren J.S., 1990).

Продукция ФНО-альфа в ткани мозга характерна для РС и достигает максимума в хронических очагах с реактивацией процесса по краям. Макрофаги в центре очагов и микроглия в гистологически неизмененной паренхиме также способны вырабатывать ФНО-альфа (Brosnan C.F. et al., 1995). Исследования продукции ФНО-альфа культурами клеток крови выявили более высокие уровни продукции у больных РС по сравнению с контролями (Beck J. Et al., 1988; Merill J.E. et al., 1989; Imamura K. et al., 1993). Было установлено достоверное повышение продукции ФНО-альфа у больных РС в активную стадию ремиттирующего или первично-прогрессирующего течения заболевания по сравнению с контрольными показателями или данными при стабилизации заболевания (Chofflon M. et al., 1992, Rieckman F. Et al., 1994). Клоны клеток из ликвора больных РС также продуцируют повышенное количество ФНО-альфа (Benvenuto R. Et al., 1994). Гусев Е.И., Пинегин Б.В. и др. (1991) предложили считать повышение продукции ФНО-альфа предвестником активизации иммунопатологического процесса при РС. Максимальное повышение продукции этого цитокина наблюдается за 5-14 дней до клинического обострения заболевания, снижаясь в подострую стадию. Это было подтверждено последующими исследованиями, показавшими, что повышение продукции ФНО-альфа клетками крови больных РС может быть одним из наиболее точных маркеров активации патологического процесса при РС (Rieckmann P. Et al., 1994; Navikas V. et al., 1996).

В лаборатории нейроиммунологии Института мозга человека РАН были исследованы уровни спонтанной и митоген-индуцированной продукции ИЛ-1бета, ИЛ-6 и ФНО-альфа (иммуноферментный анализ, тест-системы “Immunotech”, Франция). Группу сравнения (контрольную) составили больные другими невоспалительными неврологическими заболеваниями.

В группе больных с обострением РС было выявлено повышение спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-1бета, которая составила соответственно 238 и 232%; ИЛ-6 – до 331 и 207%, а также повышение уровня продукции ФНО-альфа: спонтанной до 518, и индуцированной - до 396% от соответствующих показателей в группе сравнения.

В стадию ремиссии обнаружено снижение спонтанной продукции ИЛ-1? до 72% от показателей в группе сравнения. Уровень стимулированной продукции составил 150%. Наблюдалось незначительное повышение спонтанной и индуцированной продукции ИЛ-6 – до 140 и 130% соответственно от уровня в контрольной группе. Как и в период обострения, отмечалось усиление спонтанной и стимулированной продукции ФНО-?, который составил 280 и 390% от соответствующих показателей в группе сравнения.

Результаты исследования свидетельствуют, что показатели спонтанной продукции цитокинов имеют более выраженные различия в зависимости от стадии заболевания, в отличие от соответствующих показателей при ответе на индуктор, что особенно проявляется при сопоставлении уровней ИЛ-1? и ИЛ-6, и, в меньшей степени, ФНО-?. Эти данные подтверждают наличие аномалий в цитокиновой сети при рассеянном склерозе, свидетельствующие об усилении продукции провоспалительных цитокинов, особенно в период обострения заболевания. Исследование цитокинового профиля позволяет уточнить стадию патологического процесса и оптимизировать коррекцию иммунологических нарушений.

Изменения иммунологического статуса у пациентов с рассеянным склерозом находятся в зависимости от стадии заболевания, характера его течения и проводимой терапии.

Объектом иммунологического исследования при рассеянном склерозе могут служить периферическая кровь, ликвор, слюна и другие биологические жидкости.

К настоящему времени не утратили актуальности предложенные в 1997 году Д.Хайером диагностически значимымые показатели, среди которых выделяются:

1 - повышение уровня гамма-глобулинов в спинно-мозговой жидкости (СМЖ) (у 75% больных); 2 – выявление олигоклональных иммуноглобулинов G в СМЖ (у 85-90% больных) уже на ранней стадии заболевания; 3- повышение содержания основного белка миелина в ликворе, что может служить признаком обострения процесса; об активном процессе демиелинизации могут свидетельствовать значения этого показателя более 9 нг/мл.

В диагностических критериях рассеянного склероза (2005) присутствует пункт на исследование ликвора (олигоклональные группы иммуноглобулинов G или повышенный индекс иммуноглобулинов G).

Обнаружение олигоклонального иммуноглобулина G в ликворе с помощью изоэлектрофокусирования, ассоциированного с иммунодетекцией, признано наиболее чувствительным и информативным иммунологическим методом диагностики рассеянного склероза. Принцип метода состоит в изоэлектрофокусирующем электрофорезе, распределяющем белки в геле в соответствии с их изоэлектрической точкой, в которой их заряд является нейтральным. Далее места фиксации иммуноглобулина G окрашиваются с помощью иммуноблоттинга, накопление одинаковых молекул иммуноглобулина G (со строго одинаковым зарядом) создает четкие полосы в геле.

Следует подчеркнуть, что выявление олигоклональных групп иммуноглобулина G в ликворе не является строго специфичным для рассеянного склероза тестом. Иммуноглобулины G могут быть выявлены у больных с различными воспалительными заболеваниями мозга, неврологическими проявлениями СПИДа и другими заболеваниями. В то же время около 5% больных с клинически достоверным рассеянным склерозом могут не иметь олигоклональные группы иммуноглобулинов G в ликворе, а специфичность олигоклональных иммуноглобулинов может меняться по мере развития заболевания.

При получении результатов анализа ликвора необходимо также обращать внимание на следующее: у подавляющего числа больных рассеянным склерозом общий белок ликвора составляет менее 70 мг/дл; цитоз обычно не превышает 50/мм3; 90% клеток ликвора относятся к лимфоцитам, и Т-клетки составляют почти 90% из них.

Иммунологическое исследование крови является менее значимым для диагностики.

Для оценки характера течения рассеянного склероза используются менее инвазивные и более доступные методы (материалом для исследования является периферическая кровь):

цитофлюориметрический или иммунофлюоресцентный методы определения с помощью наборов моноклональных антител (CD3+, CD4+, CD8+, CD20+; CD25+ и др.) субпопуляций Т- и В-лимфоцитов.
метод оценки пролиферации лимфоцитов: спонтанной и под действием Т- и В-клеточных митогенов (ФГА, Кон-А, PWМ) и ОБМ - реакция бласттрансформации лимфоцитов;
метод определения активности супрессорных лимфоцитов: спонтанной и Кон-А индуцированной;
метод определения чувствительности к нейроспецифическим антигенам иммунокомпетентных клеток - основному белку миелина, белку S-100, антигену нейрональных мембран, галактоцереброзидам и др. - реакция торможения адгезии лейкоцитов;
метод определения кислородзависимой бактерицидности фагоцитирующих клеток периферической крови в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест);
метод радиальной иммунодиффузии в геле для определения количества иммуноглобулинов классов A, G, M.

В Юсуповской больнице применяются все современные точные методы диагностики рассеянного склероза, включая иммунологические исследования крови.

Иммунологические показатели при рассеянном склерозе могут изменяться и отражать динамику заболевания. Их оценка помогает контролировать течение патологии, вовремя выявлять начинающиеся обострения и ремиссии.

Помимо иммунологического анализа крови, в Юсуповской больнице применяются такие эффективные методы диагностики при рассеянном склерозе, как иммуноферментный анализ, транскраниальная магнитная стимуляция, генотипирование полиморфных вариантов генов, исследование вызванных потенциалов.

У нас есть все возможности для того, чтобы вовремя установить правильный диагноз, контролировать состояние пациента в динамике, своевременно назначать эффективное лечение.

Наши специалисты

Цены на диагностические исследования при рассеянном склерозе

Иммунологические исследования

Рассеянный склероз является аутоиммунным заболеванием, поэтому для диагностики и скрининга важно следить за состоянием клеточного и гуморального иммунитета. Для это в Юсуповской больнице применяются иммунологические исследования. Материалом исследования является кровь.

Показатели крови при рассеянном склерозе

Наиболее информативными показателями при рассеянном склерозе являются следующие:

уровень CD4+-T-лимфоцитов;
уровень CD8+-Т-лимфоцитов;
соотношение CD4+/CD8+ T-лимфоцитов;
уровень интерферона-гамма.

Иммунологические исследования целесообразно применять для контроля за течением рассеянного склероза, так как показатели могут варьироваться и отображать динамику заболевания. Также важно иметь в виду, что изменение иммунологических показателей опережает развитие клинической картины.

Изменение показателей при обострении

С началом обострения в крови меняется соотношение клеток Т-помощников (CD4+-T-лимфоцитов) и Т-супрессоров (CD8+-Т-лимфоцитов). Исследование позволяет обнаружить неясное по происхождению обострение, определить, насколько активно долго длящееся обострение и целесообразно ли для уменьшения его проявления соответствующее лечение.

Не менее важным показателем является соотношение CD4+/CD8+ T-лимфоцитов. В норме оно составляет около 1,3, а у больных рассеянным склерозом - 1,7-1,8.

Изменения интерферонового статуса

Интерфероновый статус также претерпевает значительные изменения в различные периоды заболевания. Повышение уровня интерферона в сыворотке крови может свидетельствовать об острой стадии заболевания, а нормализация показателей обычно совпадает с процессами выздоровления. Также исследования свидетельствуют о прямой связи между показателями уровня интерферона-гамма и тяжестью заболевания и обратной связи с количеством интерферона-альфа.

Юсуповская больница обладает возможностями проведения всех необходимых диагностических мероприятий при рассеянном склерозе, включая иммунологические исследования. Высококвалифицированные специалисты помогут интерпретировать результаты исследований и составят индивидуальный план лечения.

Читайте также: